缺氧缺血再灌注新生鼠磷酸化的环磷酸腺苷反应元件结合蛋白、神经生长因子对神经元的保护作用

摘要

目的 探讨神经元的抗凋亡保护机制,评价环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(CREB)、神经生长因子(NGF)对神经元损伤后的保护作用.方法 7日龄Spragu-Dawley新生大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑损伤(HIBD)未治疗组、小干扰RNA(siRNA)治疗组、siRNA加NGF治疗组.按照改良的Rice法制备HIBD再灌注模型,各治疗组于再灌注后开始予1次siRNA干预治疗(10 mg/kg);siRNA加NGF组予NGF(15μg/kg),1次/d.于治疗的不同时间通过免疫组织化学和Western blot法检测磷酸化的CREB、NGF在仔鼠HIBD再灌注后海马、丘脑神经元的表达变化.通过Thionine染色检测神经元凋亡.结果 HIBD未治疗组3 h仔鼠右侧海马CA1区磷酸化的CREB(p-CREB)表达达高峰,7 d后降至假手术对照水平.3 h NGF表达开始增加,12 h持续达高峰,7 d后仍明显高于假手术组(P＜0.05).siRNA治疗组p-CREB与NGF表达随时间逐渐下降.HIBD再灌注未治疗组24 h右侧海马CA1区已有明显的凋亡,7 d神经元凋亡与假手术组相比无统计意义.siRNA治疗组神经元有大量的丢失;而siRNA加NGF治疗组神经元与假手术组比较无明显丢失.结论 CREB经信号转导调节大鼠NGF的表达,从而促进其神经元损伤后修复,减少神经元死亡.