携带MART-1基因减毒产单核李斯特菌抑制小鼠恶性黑色素瘤的研究

摘要

目的：探讨携带黑色素瘤分化抗原MART-1基因的减毒李斯特菌对恶性黑色素瘤的抑制作用及其机制的初步研究。
　　
　　 方法：构建pERL3-MART-1载体，通过电转化建立携带MART-1基因的△inlB LM-MART-1和△actA/△inlB LM-MART-1重组李斯特菌。浓度梯度稀释法测定各减毒菌株半数致死量LD50。C57BL/6小鼠随机分为PBS组,△inlB LM-MART-1组和△actA/△inlB LM-MART-1组。首次免疫后于第7d小鼠腹部皮下接种B16F10细胞，第14d、21d重复免疫小鼠，观察并记录肿瘤大小及小鼠生存状态。应用实时定量PCR检测肿瘤组织中MART-1表达量。流式细胞术检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞阳性率。
　　
　　 结果：经鉴定成功构建△inlB LM-MART-1和△actA/△inlB LM-MART-1。减毒株△inlB LM和△actA/△inlB LM的LD50比LM-EGD标准株毒力分别下降2个和4个数量级。体内抑瘤试验显示△inlB LM-MART-1组和△actA/△inlB LM-MART-1组较PBS组肿瘤明显减小。与PBS组比较，△inlB LM-MART-1组抑瘤率46.95％(F=6.3,P<0.05),△actA/△inlB LM-MART-1抑瘤率为83.96％(F=37.8,P<0.001),差异均有统计学意义。PBS组、△inlB LM-MART-1组和△actA/△inlB LM-MART-1组肿瘤组织中MART-1表达量递增，以ＰＢＳ组表达量为１，后两组为8.988±0.207和11.315±0.445，各组间均有明显统计学差异（P<0.05），且三组小鼠脾细胞中CD4+CD25+T细胞阳性率依次为2.52±0.20％，1.14±0.13％和0.44±0.15％（2.52±0.20％ vs 1.14±0.13％，F=271.7,P<0.001； 2.52±0.20％ vs 0.44±0.15％，F=564,P<0.001；2.52±0.20％ vs 0.44±0.15％,F=95.7,P<0.001）。差异均有统计学意义。
　　 结论：携带MART-1基因减毒产单核李斯特菌毒性明显低于李斯特菌标准株，用重组减毒LM免疫荷瘤小鼠可以有效抑制黑色素瘤生长，并且延长小鼠生存期。

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文摘

英文文摘

论文说明:英文缩写表及中文对照

声明

前 言

材料与方法

研究结果

讨 论

参考文献

综 述重组减毒单核细胞增多性李斯特菌作为疫苗载体在抗肿瘤中的研究进展

附 录攻读硕士学位期间发表文章

致 谢