洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和NF-κB表达的影响

摘要

第一部分:
　　 目的：
　　 观察中药复方洁泽1号对白色念珠菌与人阴道上皮细胞粘附率的影响。进一步明确洁泽1号防治外阴阴道假丝酵母菌病可能的作用机制。
　　 方法：
　　 设置模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。将人阴道上皮细胞（VK2/E6E7）以不同药物的处理相应时间，即洁泽1号与细胞共孵育72小时、小檗碱与细胞共孵育48小时、甘露聚糖与细胞共孵育2小时、高碘酸与细胞共孵育10分钟后，给予已标记FITC的白色念珠菌室温下避光摇床共孵育2小时。MTT法检测洁泽1号及小檗碱的药物细胞毒性、流式细胞术检测白色念珠菌与阴道上皮细胞的粘附率。
　　 结果：
　　 1、 洁泽1号、小檗碱对VK2/E6E7细胞的药物毒性：
　　 MTT法检测药物的细胞毒性，结果：洁泽1号对VK2/E6E7细胞的IC50为100.8279mg/ml，IC20为36.0579mg/ml。小檗碱对VK2/E6E7细胞的IC50为21.2164umol/L，IC2010.696umol/L。
　　 2、 洁泽1号对白色念珠菌与上皮细胞粘附率的影响：
　　 阴道上皮细胞与白色念珠菌孵育2小时后，流式细胞术检测法检测白色念珠菌与VK2/E6E7细胞的粘附率：模型组粘附率为(24.5768+1.575)％；甘露聚糖组粘附率为(7.2167+0.3667)％；高碘酸组粘附率为(22.7767+2.3034)％，；洁泽1号粘附率为(11.05+0.3897)％，小檗碱组粘附率为(12.4667+1.266)％。洁泽1号组、小檗碱组较模型组VK2/E6E7细胞与白念菌粘附率下降，结果有统计学意义（p<0.05），较甘露糖组粘附率增高，结果有统计学意义（p<0.05），甘露糖组较模型组粘附率下降，结果有统计学意义（p<0.01），高碘酸组较模型组结果无统计学意义（p>0.05）。
　　 结论：
　　 中药复方洁泽1号能减少白色念珠菌与宿主细胞，即VK2/E6E7的粘附，增强阴道上皮细胞抵抗念珠菌入侵的能力。
　　 第二部分:
　　 目的：
　　 研究洁泽1号对经白色念珠菌刺激后的阴道上皮细胞，其天然免疫因子TLR4及NF-κB表达的影响，探讨洁泽1号对人阴道上皮细胞抗白色念珠菌感染的部分天然免疫机制。
　　 方法：
　　 设置空白对照组、模型组、12.5mg/ml洁泽1号组、5umol/L小檗碱组、3mg/ml甘露聚糖组和5mmol/L高碘酸组。将人阴道上皮细胞与白色念珠菌热灭活孢子37℃共培养12小时后，与药物共孵育相应时间。免疫荧光技术观察TLR4在胞浆的表达时间以及NF-κB由胞浆进入胞核的时间，Western-blotting技术检测经白色念珠菌刺激后阴道上皮细胞TLR4的表达及NF-κB在细胞核内的表达。
　　 结果：
　　 1、 TLR4在细胞浆及NF-κB由胞浆进入胞核的时序变化予白色念珠菌热灭活孢子与阴道上皮细胞37℃共培养，激光共聚焦显微镜观察可见：共培养2小时后，TLR4开始表达，4小时、6小时后TLR4表达逐渐增多，12小时表达达到高峰，24小时表达开始回落。NF-κB亦以同样的时间趋势进入细胞核内。即白色念珠菌与细胞共培养12小时为TLR4与NF-κB的表达高峰的时相。
　　 2、 白色念珠菌刺激后各组VK2/E6E7细胞TLR4及NF-κB的表达在TLR4的表达上，模型组与正常组相比，TLR4表达增多，结果有极显著统计学意义（P<0.01）。甘露聚糖组与模型组相比，TLR4表达无统计学意义（P>0.05）；洁泽1号组、小檗碱组、高碘酸组较模型组减少，均有极显著统计学意义（P<0.01）。
　　 在NF-κB的表达上，模型组与正常组相比，NF-κB表达增多，结果有极显著统计学意义（P<0.01）。高碘酸组、洁泽1号组、小檗碱较模型组NF-κB表达减少，结果均有极显著统计学意义（P<0.01）；甘露糖组较模型组NF-κB表达增多，其结果有统计学意义（P<0.01），高碘酸、小檗碱与洁泽1号组之间无统计学差异（P>0.05）。
　　 结论:
　　 洁泽1号下调感染白色念珠菌后VK2/E6E7细胞天然免疫因子TLR4的表达、减少细胞内NF-κB的激活，可能因此导致其下游炎性因子分泌减少，起到阻止急性炎症反应的作用。

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前 言

第一部分：洁泽1号对阴道上皮细胞与白色念珠菌粘附率的影响

第二部分：洁泽1号对阴道上皮细胞天然免疫因子TLR4及NF-κB表达的影响

讨 论

结 语

综述

致 谢