UbiquitinB在17-AAG诱导HeLa细胞周期阻滞中的作用研究

摘要

【研究背景及目的】在多种不同种类的肿瘤模型中，选择性的抑制Hsp90 功能可诱导细胞增殖、细胞周期调节和凋亡过程中重要的信号分子的选择性降解。本研究在于探讨已进入临床试验的Hsp90 抑制剂17-AAG在诱导细胞周期阻滞过程中Ubiquitin B的作用及其作用机制。
　　 【研究方法】人宫颈癌细胞系Hela细胞经17-AAG 作用一段时间后，使用流式细胞仪和荧光分光光度计分别检测Hela细胞周期分布情况和细胞糜蛋白酶样蛋白酶体活性变化情况； siRNA 干扰细胞中Ubb基因的正常表达后，再经17-AAG 处理一段时间，利用Real Time PCR技术验证siRNA的干扰效应，流式细胞仪检测细胞周期的分布情况并用Western Blot 检测细胞周期相关蛋白的表达变化。
　　 【研究结果】 17-AAG 处理24 h后，随着药物浓度的升高，HeLa细胞中G2/M 期的细胞比例从未加药处理的（14.38±4.93）％上升到1umol/L 时的（52.38±5.67）％，差异具有统计学意义（P＜0.05），同时蛋白酶体活性显著增强，Western Blot 检测发现17-AAG 处理24 h后Cdk1和Hec1等周期相关蛋白下调，但Mad2的表达未见明显变化；利用siRNA 干扰Ubb后，500 nmol/L和1 umol/L的17-AAG 诱导的G2/M 期细胞比例分别由转染前的（32.68±3.79）％和（43.98±1.99）％下降至转染后的（17.07±2.22）％和（25.95±6.69）％，同时Cdk1和Hec1的下调表达也被明显的逆转。
　　 【结论】 Hsp90 抑制剂诱导的Hela细胞周期阻滞主要由细胞周期检测点蛋白的范素化介导，Ubb 可能是17-AAG 诱导周期阻滞的一个靶点和宫颈肿瘤治疗的新靶点。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

1 材料与仪器

2 实验方法

3 实验结果

参考文献

综述 Hsp90 抑制剂：一类新型抗肿瘤药物

致谢

附录 攻读硕士学位期间发表的学术论文