自吞噬对脓毒症乳鼠心肌细胞活性及线粒体膜电位的影响

摘要

目的：观察自吞噬在LPS 致脓毒症心肌抑制中的作用，并探讨其对心肌细胞活性和线粒体功能的影响。
　　 方法：以体外培养的1-3天的乳鼠原代心肌细胞作为研究对象，单用脂多糖（LPS）刺激或预加自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）(10mM）干预后再予以LPS 刺激。实验随机分为四组：（1）阴性对照组:常规心肌细胞培养，不予任何处理；（2）LPS组:给予LPS,按检测要求调整培养时间；（3）3MA+LPS组：预先给予10mM3MA 作用48h后，加入LPS，按检测要求调整培养时间；（4）3MA组：只给予10mM3MA48h的预处理，不做其他处理。利用Western Blot 检测自噬体膜标志性蛋白质LC3-II/LC3-I 比值的变化以评价自噬形成，用MTT 法检测细胞活力，流式细胞术测定线粒体膜电位（MMP）。
　　 结果：与对照组相比，LPS 作用呈剂量依赖性抑制细胞活力，当LPS 浓度达到5ug/ml（P<0.05）和10ug/ml 时（P<0.01），细胞活性被明显抑制；LPS 作用2h时，自噬体膜标志性蛋白质LC3II/LC3I 比值明显提高（P<0.05），于8h 时其表达达到峰值（P<0.01），而于24h 时蛋白表达有所回落，但仍然高于对照组（P<0.05）；LPS 作用2h 时线粒体膜电位显著降低（P<0.01）,持续到本实验观察点8h(P<0.05),随着作用时间延长，膜电位有回升的趋势，到24h 观察点时，膜电位基本回到基线水平。与LPS组比较，预先给预3-MA 再给予不同浓度LPS，3-MA 可显著抑制不同浓度LPS 作用下心肌细胞活性（P<0.05）。此时自噬体膜标志性蛋白质LC3II/I 明显降低（P<0.05）。在2h,4h,8h 时3MA 对LPS 作用下的MMP 无显著作用，但16h,24h 时3MA 显著降低LPS 作用下MMP（P<0.01）。
　　 结论：LPS 可以诱导自噬发生，并可显著降低乳鼠心肌细胞活性及线粒体膜电位。而抑制自噬可以加重这种损害。说明自噬在脓毒症心肌抑制中起保护作用，而这或是通过调节线粒体的功能来实现的。

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结 论

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综述：自吞噬与心血管疾病

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