米邦塔仙人掌果胶对小鼠慢性温和型应激模型抑郁样症状及学习记忆的改善作用

摘要

目的:
　　研究本实验室分离提取的米邦塔仙人掌果胶(milpa alta cactus pectin,MCP)对小鼠慢性温和型应激模型抑郁样症状的改善作用;研究MCP对小鼠慢性温和型应激模型学习记忆的改善作用,并初步探讨其作用机制;研究GABAA激动剂WAY-141839对MCP处理小鼠慢性温和型应激模型海马CA1区突触可塑性的影响。
　　方法:
　　采用15-20g健康雄性昆明种小鼠,Morris水迷宫(MWM)筛选之后,将合格小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、MCP低剂量组(50mg/kg)、MCP中剂量组(100mg/kg)、MCP高剂量组(200mg/kg)、阳性对照组(20mg/kg)。采用慢性温和型应激(chronic mild stress,CMS)方法造模6周,造模期间空白对照组与模型组每天灌胃给予双蒸水0.1ml/10g,另外四组分别按照对应药物浓度每天灌胃给药。造模期间,每周三从13:00起对小鼠进行断水断食处理,8h后称量小鼠体重;于21:00-周四9:00测试小鼠糖水与双蒸水消耗量,并计算小鼠糖水偏爱性;造模结束24h后进行悬尾实验,48h后进行强迫游泳实验,96h后进行MWM实验。完成以上行为学实验后将小鼠麻醉、断头取脑,制备400μm冠状切片,记录海马CA1区兴奋性突触后电位以及WAY-141839对兴奋性突触后电位LTP维持和诱导的影响。
　　结果:
　　1.MCP对CMS小鼠体重变化率的影响:
　　从CMS造模第1周起,模型组小鼠体重变化率明显低于空白对照组(P<0.01);至造模结束时,与模型组比较,MCP中剂量显著增加CMS小鼠体重变化率(P<0.05),MCP高剂量及Flu能更为显著的增加CMS小鼠体重变化率(P<0.01)。
　　2.MCP对CMS小鼠糖水偏爱性的影响:
　　从CMS造模第2周起,模型组小鼠糖水偏爱性明显低于空白对照组(P<0.01);至造模第5周及第6周,MCP中剂量、MCP高剂量及Flu显著增加CMS小鼠糖水偏爱性,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。
　　3.MCP对CMS小鼠悬尾实验潜伏期及累计不动时间的影响:
　　与空白对照组比较,模型组小鼠潜伏期显著缩短(P<0.01),累计不动时间显著延长(P<0.01);与模型组比较有,MCP高剂量组显著增加CMS小鼠潜伏期(P<0.05),MCP中剂量、MCP高剂量及Flu显著缩短CMS小鼠累计不动时间(P<0.01)。
　　4.MCP对CMS小鼠强迫游泳实验潜伏期及累计不动时间的影响:
　　与空白对照组比较,模型组小鼠潜伏期显著缩短(P<0.01),累计不动时间显著延长(P<0.01);与模型组比较有,MCP各给药组并没能显著延长CMS小鼠潜伏期(P>0.05),MCP高剂量及Flu显著缩短CMS小鼠累计不动时间(P<0.05)。
　　5.MCP对CMS小鼠空间学习记忆的影响:
　　学习训练结束时,与空白对照组比较,模型组小鼠逃逸潜伏期明显增加(P<0.01),游泳总路程显著增加(P<0.01),在目标象限游泳路程/游泳总路程明显降低(P<0.05);与模型组比较,MCP中剂量、MCP高剂量及Flu明显降低CMS小鼠逃逸潜伏期(P<0.01)及游泳总路程(P<0.05),但对小鼠在目标象限游泳路程/游泳总路程仅表现出一定的改善趋势,无显著性影响(P>0.05)。CMS造模、MCP及Flu给药对小鼠游泳速度均无影响(P>0.05)。空间探索实验结果显示,模型组小鼠穿越平台次数显著低于空白对照组(P<0.01),MCP中剂量、MCP高剂量及Flu显著增加CMS小鼠穿越平台的次数。
　　6.MCP对CMS小鼠海马CA1区突触可塑性的影响:
　　CMS造模显著降低小鼠海马CA1区长时程增强,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05);MCP中剂量、MCP高级量及Flu显著改善CMS小鼠LTP,与模型组比较有显著性差异。CMS造模对小鼠海马CA1区输入/输出曲线(I/O)无显著影响,但MCP中剂量组及MCP高剂量组I/O明显高于模型组(P<0.05);Flu对CMS小鼠I/O曲线无明显影响。模型组双脉冲比率显著低于空白对照组(P<0.05),MCP高剂量组及阳性对照组双脉冲比率明显高于模型组(P<0.05)。
　　7.WAY-141839对MCP处理CMS小鼠海马CA1区突触可塑性的影响:
　　⑴ WAY-141839对MCP处理CMS小鼠海马CA1区LTP维持的影响:高频刺激(HSF)后30min,给以2.3μM WAY-141839,观察到各组LTP之间无显著性差异。我们以给予WAY-141839后所得各组LTP均值与正常记录所得各组LTP均值做差,结果显示WAY-141839明显降低空白对照组、MCP高剂量组及阳性对照组LTP;与之相反的是模型组、MCP低剂量组和MCP中剂量组LTP却明显增加,但MCP中剂量组与模型组比较,其增加幅度较低(P<0.05)。
　　⑵WAY-141839对MCP处理CMS小鼠抑郁模型海马CA1区LTP诱导的影响:在WAY-141839作用下各组基线呈现不同程度的下降,与空白对照组比较,模型组下降程度明显降低(P<0.01);与模型组比较MCP中剂量组和MCP高剂量组基线下降程度显著增加(P<0.01)。在WAY-141839作用下各组LTP间并无显著性差异,以WAY-141839后所得各组LTP均值与正常记录所得各组LTP均值做差,结果显示WAY-141839显著降低空白对照组、MCP中剂量组、MCP高剂量组及阳性对照组LTP,而增加模型组、MCP低剂量组LTP,且MCP低剂量组LTP增加明显高于模型组(P<0.01)。
　　结论:
　　MCP呈剂量依赖性的缓解CMS小鼠的抑郁样症状及空间学习记忆能力,中剂量(100mg/kg)和高剂量(200mg/kg) MCP作用尤其明显。MCP可能通过缓解CMS小鼠海马CA1区突触可塑性损伤而改善学习记忆。WAY-141839实验结果表明MCP能较好的缓解CMS小鼠海马CA1区抑制性突触传导损伤。

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第一部分 米邦塔仙人掌果胶的提取

1.材料与仪器

2.米邦塔仙人掌果胶提取工艺

参考文献

第二部分 米邦塔仙人掌果胶对小鼠慢性温和型应激模型抑郁样症状的改善作用

实验一 Morris水迷宫筛选小鼠及慢性温和型应激模型制作

1.材料与方法

2.实验结果

3.讨论

实验二 MCP对小鼠慢性温和型应激模型体重和糖水偏爱性的影响

1.材料及方法

2.实验结果

实验三 MCP对小鼠慢性温和型应激模型悬尾实验和强迫游泳实验的影响

1.材料与方法

2.实验结果

3.讨论

参考文献

第三部分 米邦塔仙人掌果胶对小鼠慢性温和型应激模型学习记忆及其海马CA1区突触可塑性的影响

1.材料与方法

2.实验结果

3.讨论

参考文献

第四部分 WAY-141839对米邦塔仙人掌果胶处理小鼠慢性温和型应激模型海马CA1区突触可塑性的影响

1.材料与方法

2.实验结果

3.讨论

参考文献

全文总结及创新点

文献综述

参考文献

攻读硕士期间科研成果

致谢