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穿心莲对内皮细胞粘附分子表达的影响及机制研究

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1 实验所需材料及实验方法

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目的:探讨穿心莲对人脐静脉内皮细胞粘附分子表达的影响及机制研究。
  方法:产科手术室取健康新生儿脐带(无菌条件下),用胰酶消化人脐静脉内皮细胞,并进行原代培养及细胞传代。选择第三代细胞进行形态学观察,使用免疫荧光鉴定内皮细胞。实验一共分成5组,每个组设6个复孔:
  (1)、空白对照组,仅给予M199基础培养基培养内皮细胞24小时。
  (2)、氧化修饰的脂蛋白(ox-LDL)组。
  (3)、ox-LDL+AP50mg/L组。
  (4)、ox-LDL+AP100mg/L组。
  (5)、ox-LDL+AP200mg/L组。
  37摄氏度温箱培养48小时后取上清、离心;用ELISA试剂盒检测ICAM-1、VCAM-1、E-选择素蛋白浓度;用胰酶进行消化并收集各组的细胞,采用流式细胞术测定内皮细胞表面抗原CD40/CD40L表达的平均免疫荧光强度。
  结果:与对照组相比,ox-LDL组可促进粘附分子VCAM-1、ICAM-1、E-选择素蛋白及CD40、CD40L的表达,P<0.01;与ox-LDL组相比,低浓度的穿心莲内酯(50mg/L)对粘附分子VCAM-1、ICAM-1、E-选择素蛋白及CD40、CD40L的表达无明显影响,P>0.05;而中、高浓度的穿心莲内酯(100mg/L、200mg/L)对粘附分子VCAM-1、ICAM-1、E-选择素蛋白及CD40、CD40L的表达有抑制作用,P<0.01,其中高浓度的穿心莲内酯抑制作用更明显,P<0.01;且粘附分子VCAM-1、ICAM-1、E-选择素蛋白的表达与CD40/CD40L的表达呈正相关,相关指数R>0.7。
  结论:中等以上浓度的穿心莲内酯具有抑制内皮细胞表达粘附分子VCAM-1、ICAM-1、E-选择素蛋白的作用,作用的机理可能是通过对CD40-CD40L信号系统的抑制来完成的。

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