靶向封闭STAT3信号传导通路增强卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性及其分子机制的初步研究

摘要

第一部分靶向封闭STAT3信号传导通路增强卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性
　　【目的】卵巢癌是妇科肿瘤中致死率最高的肿瘤,以紫杉醇、铂类等药物为基础的化疗是目前卵巢癌的主要治疗方法,但化疗耐药已成为阻碍卵巢癌治疗的难题。最近发现信号转导及转录激活因子3(signal transduction and activators transcription,STAT3)与化疗耐药紧密相关,并且与多种实体瘤的复发相关。本研究主要探索靶向封闭STAT3信号传导通路对卵巢癌耐药的逆转作用。
　　【方法】转染针对STAT3的特异性siRNA,靶向封闭卵巢癌细胞内STAT3的表达及其信号通路的传导,用Real time PCR及免疫蛋白印迹(Western blotting)检测转染细胞内STAT3及其活化形式pSTAT3的mRNA及蛋白表达水平。流式细胞术(FCS)检测不同处理组细胞的凋亡率,MTT法检测不同处理组细胞的存活率。
　　【结果】与各对照组细胞相比,si-STAT3转染组卵巢癌细胞内STAT3及pSTAT3的表达均显著下降。STAT3被靶向封闭后,耐药的卵巢癌细胞对DDP的IC50值明显下降,凋亡率显著增加,差异均有统计学意义。
　　【结论】靶向阻断STAT3信号传导通路的作用可以增强卵巢癌对DDP的敏感性。
　　第二部分靶向封闭STAT3信号传导通路增强卵巢癌耐药细胞对顺铂敏感性的分子机制的初步研究
　　【目的】前述实验已经证实靶向封闭STAT3信号传导通路可以增强卵巢耐药细胞对顺铂的敏感性,本研究主要继续探索SATA3与卵巢癌细胞耐药之间关系的分子机制。
　　【方法】Western blotting、流式细胞术检测外源性IL-6诱导DDP敏感的卵巢癌细胞内STAT3和p-STAT3在蛋白水平的表达变化及其对DDP敏感程度的变化。TMRE(Tetramethylrhodamine ethylester)染色法检测各组卵巢癌细胞经过不同处理后其线粒体膜电位(ΔΨm)的变化,并用Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Bax及Cytochrome C的表达。免疫荧光及Western blotting技术检测应用DDP处理细胞后,细胞自噬(Autophagy)相关蛋白LC3的变化,并联合应用3-MA(3-methyladenine)处理细胞后,流式细胞术、Western blotting技术检测细胞凋亡率的变化及p-STAT3在蛋白水平的变化。
　　【结果】IL-6可以诱导DDP敏感的卵巢癌细胞内STAT3的活化,降低对其对DDP的敏感性,而靶向阻断STAT3的活化可以逆转IL-6的耐药诱导作用。靶向封闭STAT3与DDP联用可使卵巢癌细胞线粒体膜电位降低,诱导线粒体途径的细胞凋亡。卵巢癌耐药细胞株应用DDP后可诱导细胞自噬的发生,从而降低细胞的死亡率,3-MA阻滞此过程可以增强细胞对DDP的敏感性,同时可以抑制STAT3的活化,然而siRNA靶向沉默STAT3并不能减少LC3Ⅱ的转化,抑制自噬活性。
　　【结论】靶向阻断STAT3可以通过逆转IL-6耐药诱导,增强线粒体途径凋亡及在细胞自噬途径中发挥作用等机制增强卵巢癌耐药细胞对顺铂耐药的敏感性的作用。

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第一部分靶向封闭STAT3信号传导通路增强卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性

中文摘要

英文摘要

前 言

材料与方法

实验结果

讨 论

参考文献

第二部分靶向封闭STAT3信号传导通路增强卵巢癌耐药细胞对顺铂敏感性的分子机制的初步研究

中文摘要

英文摘要

前 言

材料与方法

实验结果

讨 论

参考文献

第三部分综 述

参考文献

致谢