缬草萜内酯体外对次氮基三醋酸铁诱导肝星状细胞增殖的影响

摘要

目的:
　　观察缬草萜内酯对肝星状细胞增殖的影响,旨在探讨其体外是否具有抗肝纤维化作用,从而为临床治疗该疾病提供一定的理论依据。
　　方法:
　　采用体外实验,分为空白对照组、模型组、缬草萜内酯A、B、C组及阳性对照组。引进肝星状细胞株并传代培养,选择细胞对数增长期,用0.2％胰蛋白酶消化,加入含10%胎牛血清的DMEM培养液,吹打成单细胞悬液,以每孔7000-8000个细胞接种于96孔培养板,培养至单层贴壁近铺满板底,除空白组之外其他各组均用含有次氮基三醋酸铁的培养液诱导细胞增殖,每孔加培养液180μl,缬草萜内酯组均加入不同浓度的A、B、C三种药物各20μl(200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL、5μg/mL),阳性对照组加入秋水仙碱20μl(0.5μg/mL)空白对照组及模型组加入等量的生理盐水。在光镜下观察细胞数量、形态。用MTT比色法观察细胞的增殖,计算抑制率。
　　结果:
　　结果表明,缬草萜内酯A、B、C(200μg/mL)三种药物对细胞抑制率分别为40%、36.4%、36.6%,与模型组比较差异有显著性(P<0.05);缬草萜内酯A、B、C(200μg/mL)组的OD值(570nm)分别为:0.231±0.014、0.245±0.025、0.244±0.018,与模型组比较,差异均有显著性(P<0.01);缬草萜内酯A、B、C(100μg/mL)对细胞抑制率分别为27.5%、21.3%、25.5%,与模型组比较差异有显著性(P<0.05),缬草萜内酯A、B、C(100μg/mL)组的OD(570nm)值分别为0.279±0.021、0.303±0.015、0.287±0.015,与模型组比较,差异均有显著性(P<0.01),但其它三个浓度组与模型组比较均未见显著性差异(P>0.05);缬草萜内酯A、B、C200μg/mL和100μg/mL剂量组分别与阳性对照组OD值比较,差异均无显著性(P>0.05);模型组与阳性对照组OD值比较差异有显著性(P<0.05)。光镜下观察:模型组细胞数量较多,HSC细胞生长呈均匀的梭形,多边形或长条形,折光性好,很少有细胞碎片和漂浮的细胞。而在A、B、C200μg/mL及A、B、C100μg/mL剂量组以及阳性对照组孔内细胞突触消失,形态变圆,折光性差,可见细胞碎片,胞液可见漂浮的细胞。在光镜下观察200μg/mL组与100μg/mL组,其差别不明显。
　　结论:
　　1、缬草萜酯A、B、C高剂量组(200μg/mL)具有明显抑制肝星状细胞增殖作用;同时中剂量组(100μg/mL)也具有抑制肝星状细胞增殖作用。
　　2、随药物浓度下降,药物对HSC增殖抑制作用随着下降,表现出一定的剂量依赖关系。
　　3、缬草萜酯A、B、C三种药物在同等浓度时效果相似。

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