高血压合并房颤患者抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的检测及其对人心房肌细胞电生理特性影响的研究

摘要

第一部分高血压合并房颤患者抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的检测及其临床意义
　　目的:自身抗体在心血管疾病中逐渐被发现,越来越多的证据表明自身免疫机制参与其中并发挥着重要作用,在心律失常中也是如此。本实验的目的是观察高血压合并房颤患者自身抗体抗M2胆碱能受体抗体(AAM2R)和抗肌球蛋白重链抗体(AAMHC)的变化以及二者与房颤的关系。
　　方法:研究选取高血压患者共295例,分为高血压合并房颤组(145例)和高血压非房颤组(150例)。采集血样,通过ELISA方法检测血清中四种自身抗体(AAM2R/AAMHC/AAβ1R/AAANT)的阳性率,并进一步通过单变量和多变量logistic回归分析自身抗体与房颤的关系。研究还选取了健康体检者80例作为正常对照组,与上述两组高血压患者比较自身抗体阳性率的差异。
　　结果:与高血压非房颤组患者相比,高血压合并房颤组患者自身抗体AAM2R和AAMHC的阳性率显著升高(AAM2R:44.8％vs13.3％;AAMHC:27.6％vs14.7％;P<0.01),并且自身抗体阳性组患者房颤的发病率较抗体阴性组也显著增加(AAM2R:76.5％vs38.1％,P<0.001;AAMHC:64.5％vs45.1％,P<0.01);多变量分析显示自身抗体是高血压患者发生房颤的危险因素和强预测因子(AAM2R:OR=5.251;AAMHC:OR=2.696)。正常对照组抗体阳性率显著低于上述两组高血压患者(P<0.05)。
　　结论:自身抗体AAM2R和AAMHC与高血压患者房颤的发生密切相关,是其重要危险因素和强预测因子,这可能提示自身免疫参与并促进了房颤的发生与维持,在其中发挥了重要作用。
　　第二部分抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的提取、纯化和鉴定
　　目的:在高血压合并房颤患者体内自身抗体AAM2R和AAMHC有较高检出率,本部分实验主要目的是验证两种自身抗体与相应抗原结合的特异性。
　　方法:利用心外科开胸手术患者(窦性心律)右心耳组织标本,提取组织蛋白和酶解分离单个心房肌细胞。采用盐析法和亲和层析法提纯血清中的抗体,利用免疫印迹和细胞免疫荧光技术验证自身抗体与相应抗原的特异性结合。
　　结果:自身抗体AAM2R能够与人心房组织蛋白M2受体和表达于CHO细胞的重组人M2受体特异性结合,免疫荧光共聚焦显微镜下可见AAM2R能与人心房肌细胞膜表面相结合,抗体阴性患者血清提取物和用抗原中和后的抗体未能结合;自身抗体AAMHC可与猪心肌肌球蛋白重链和人心房肌球蛋白重链特异性结合,并且免疫荧光共聚焦显微镜下可见AAMHC能与经破膜处理的人心房肌细胞结合,抗体阴性患者血清提取物和用抗原中和后的抗体未能结合;自身抗体AAMHC与人β1受体可发生交叉反应。
　　结论:高血压合并房颤患者血清中存在特异性的自身抗体AAM2R和AAMHC,能够分别与人心房肌M2受体和肌球蛋白重链结合,且自身抗体AAMHC与β1受体具有交叉反应。
　　第三部分抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体对人心房肌细胞复极电流及动作电位的影响
　　目的:自身抗体AAM2R和AAMHC与高血压患者房颤发生密切相关,是其重要危险因素和强预测因子。本部分实验探讨两种自身抗体对人心房肌细胞复极化电流和动作电位的影响,以阐明这两种自身抗体致心律失常的电生理作用机制。
　　方法:采集窦性心律心脏外科手术患者右心耳组织,酶解分离单个心房肌细胞;利用全细胞膜片钳技术和穿孔膜片钳技术分别记录两种自身抗体对心房肌细胞各种复极化电流(Ikach、ICa-L、Ito1、Ikur)的影响;利用全细胞穿孔膜片钳电流钳模式观察两种自身抗体对心房肌细胞动作电位的影响。
　　结果:与自身抗体阴性血清提取物相比,自身抗体AAM2R产生了受体激动样作用,可使心房肌细胞Ikach通道开放,使ICa-L电流减少,并缩短动作电位时程,但对Ito1、Ikur电流无明显影响,用相应M2受体抗原肽段中和抗体后,此作用消失;自身抗体AAMHC对ICa-L、Ito1、Ikur电流及心房肌细胞动作电位均无影响。
　　结论:自身抗体AAM2R改变了心房肌细胞离子通道的电生理特性,使之发生重构,从而有利于房颤的发生与维持,而自身抗体AAMHC未能产生这种作用,可能是通过其他机制促发房颤。因此,研究结果表明自身免疫机制与房颤密切相关,在其中发挥着重要作用,可能为将来房颤的治疗提供了新的靶点。

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英文缩略词表及中文对照

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英文摘要

前 言

参考文献

第一部分 高血压合并房颤患者抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的检测及其临床意义

资料和方法

研究结果

讨 论

参考文献

附表 和 附图

第二部分 抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的提取、纯化和鉴定

材料和方法

实验结果

讨 论

参考文献

附表 和 附图

第三部分 抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体对人心房肌细胞复极电流及动作电位的影响

材料和方法

实验结果

讨 论

参考文献

附 图

小 结

综 述

1. 自身抗体与心血管疾病

2. 自身抗体致心律失常作用及其机制

结论

参考文献

附录：发表的文章

致谢