ATDC在大肠癌中的表达及其临床意义和对肿瘤细胞生物学行为的影响

摘要

本文主要从ATDC蛋白在大肠癌中的表达及临床意义、RNA干扰沉默ATDC表达对大肠癌细胞生物学特性的影响两个方面进行了论述。
　　第一部分ATDC蛋白在大肠癌中的表达及临床意义
　　目的：通过对大肠癌临床标本中ATDC蛋白表达水平进行检测,探讨ATDC表达在大肠癌的发生发展中的作用,以及它和大肠癌临床病理特征之间的关系。
　　方法：使用免疫组织化学方法检测大肠癌病人癌组织和正常切缘组织中的ATDC蛋白表达和定位,Westernblot和RT-PCR定量ATDC蛋白的表达水平,分析ATDC蛋白和临床病理参数之间的关系。
　　结果：ATDC蛋白在切缘正常组织和癌组织表达差异有统计学意义(P<0.05),癌组织中ATDC表达在性别、年龄、Dukes分期因素之间差异无统计学意义,在淋巴结转移及分化程度因素间差异有统计学意义。
　　结论：ATDC在大肠癌组织中高水平表达,提示此基因与肿瘤的发生发展过程有关。因此为了更好的诊断和治疗大肠癌有必要检测和抑制ATDC表达。大肠癌临床病参数和ATDC表达情况相关,表明检测ATDC表达水平对于评估近期治疗效果和远期预后有一定的临床价值。
　　第二部分RNA干扰沉默ATDC表达对大肠癌细胞生物学特性的影响
　　目的：应用针对人ATDC的特异性RNA干扰(RNAi)的方法,沉默大肠癌ATDC基因表达,观察其对人大肠癌细胞株生长的抑制作用。
　　方法：设计合成针对ATDC的siRNA,利用Lipofactamine2000试剂转染到人大肠癌细胞株sw620。应用实时定量PCR(RT-PCR)检测SW620细胞ATDC mRNA表达量和Western bolt检测ATDC蛋白表达水平评估ATDC基因沉默效果,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell侵袭实验分析大肠癌细胞体外侵袭能力。
　　结果：转染siRNA组细胞较未转染组比较,RNAi使得mRNA的表达下降40％同时使得ATDC蛋白在转染组较非转染组明显下降。转染后细胞主要停留在G0/G1期,S期和S2/M期细胞数量减少。Transwell侵袭实验显示转染后细胞的转移侵袭能力下降。
　　结论：siRNA能抑制sw-620细胞中ATDC基因的表达,降低癌细胞的增殖侵袭能力。

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正文

第一部分 ATDC蛋白在大肠癌中的表达及临床意义

引言

材料与方法

实验方法

结果

讨 论

参考文献

第二部分RNA干扰沉默ATDC表达对大肠癌细胞生物学特性的影响

前 言

材料和方法

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

综述

1siRNA干扰的机制

2siRNA在肿瘤治疗研究中的应用

3目前进入临床研究的RNAi药物

4RNAi药物治疗肿瘤的面临的问题和展望

5讨论

参考文献

攻读博士期间发表的文章

致谢