甘草及无花果双水相萃取物的酪氨酸酶抑制及抗氧化活性研究

摘要

甘草是一味大宗药材,在我国中医药领域的应用已有悠久的历史,主要用于治疗肺结核、感染性肝炎、支气管炎等疾病。甘草提取物还表现出许多重要的药理学活性如解毒、免疫调节、抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等。
　　无花果具有很高的营养价值,同时还具有止咳、润肺、补脑、补血、补肾、抗癌、消肿、止泻等药用价值。无花果提取物具有抗氧化、防癌抗癌、杀菌抑菌、抗病毒等多种生物活性。无花果及其制品已被美国、日本等国家列为抗癌食品。
　　提取甘草及无花果中有效成分的方法很多,但是用双水相提取技术的研究较少。本文使用双水相萃取技术分别提取甘草和无花果中的有效成分,并对提取物的酪氨酸酶抑制及抗氧化活性进行研究。结果表明,双水相萃取后的甘草盐相、无花果盐相具有抑制酪氨酸酶活性的作用,而醇相、无水乙醇提物没有表现出抑制作用。
　　采用四种方法(抗脂质过氧化、清除ABTS+·能力、清除O2-·能力、FRAP法)研究了甘草及无花果双水相提取物的抗氧化活性。结果表明甘草双水相萃取的醇相具有良好的抗脂质过氧化活性,其活性可与槲皮素媲美;在清除ABTS+·实验中,醇相、盐相在实验浓度范围内清除活性均达到100％,其IC50值分别为0.25mg/mL、0.15mg/mL;在清除O2-·实验中,甘草双水相萃取的醇相具有良好的抑制活性,其IC50值为1.05mg/mL;在FRAP实验中,双水相萃取甘草的醇相表现良好的还原能力。
　　无花果双水相萃取物的抗氧化活性弱于甘草。例如,无花果双水相萃取的醇相表现出微弱的抗脂质过氧化作用;在清除ABTS+?实验中,无花果双水相萃取醇相与盐相均表现一定的清除能力,IC50值分别为0.47mg/mL、0.44mg/mL;在清除O2-?实验中,无花果双水相萃取醇相表现一定的清除能力,但实验浓度下未达到IC50值;在FRAP实验中,双水相萃取无花果的醇相表现出抗氧化活性。

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1 绪论

1.1 酪氨酸酶概述

1.1.1 酪氨酸酶在黑色素形成中的作用

1.1.2 酪氨酸酶抑制剂

1.2 自由基与抗氧化

1.2.1 自由基与疾病

1.2.2 抗氧化剂

1.2.3 抗氧化能力的测试方法

1.3 双水相萃取概述

1.3.1 双水相体系的形成原理

1.3.2 双水相体系的特点

1.3.3 双水相萃取在天然产物分离纯化中的应用

1.4 选题依据及研究内容

1.4.1 选题依据

1.4.2 研究内容

2 实验部分

2.1 仪器与试剂

2.1.1 主要仪器与试剂

2.1.2 试剂的配制

2.2 实验方案

2.2.1 甘草及无花果溶液的制备及浓度确定

2.2.2 酪氨酸酶抑制实验

2.2.3 抗氧化实验

3 结果和讨论

3.1 双水相萃取效率

3.2 酪氨酸酶抑制实验

3.2.1 甘草提取物对酪氨酸酶的抑制活性

3.2.2 无花果提取物对酪氨酸酶抑制活性

3.3 抗氧化实验

3.3.1 脂质过氧化实验

3.3.2 ABTS阳离子自由基（ABTS·+）清除实验

3.3.3 超氧阴离子自由基（O2-·）清除实验

3.3.4 Fe离子还原能力（FRAP）实验

3.3.5 抗氧化小结

4 全文总结

致谢

参考文献

附录 攻读硕士期间完成的主要论文