洁泽1号对阴道上皮细胞模式识别受体Dectin-1表达的影响

摘要

目的：
　　观察人永生化阴道上皮细胞(VK2/E6E7)经白色念珠菌刺激后其模式识别受体Dectin-1及衔接分子Syk表达的变化,并观察中药复方洁泽1号对其表达的影响,探讨洁泽1号是否可能通过Dectin-1/syk信号途径在人阴道上皮细胞抗白色念珠菌天然免疫中发挥作用。
　　方法：
　　第一部分:白色念珠菌对Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响
　　设置空白对照组(体外培养VK2/E6E7)及体外培养热灭活白色念珠菌与VK2/E6E7共孵育各时间段组(6h、12h、24h、48h),RT-PCR检测Dectin-1和Syk的表达变化。
　　第二部分:洁泽1号对VK2/E6E7 Dectin-1、Syk表达的影响
　　1.洁泽1号、小檗碱、酵母聚糖对VK2/E6E7细胞毒性实验
　　2.洁泽1号对VK2/E6E7模式识别受体Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响根据第一部分实验结果,将VK2/E6E7与热灭活的白色念珠菌共培养24小时后,随机分为:模型组、洁泽1号组、小檗碱组、酵母聚糖组。各组分别给与相应药物及时间干预(根据细胞毒性实验结果确定各药物浓度和作用时间),另设正常对照组。Western-blotting技术检测细胞Dectin-1和SyK的表达。
　　结果：
　　第一部分:白色念珠菌对Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响
　　RT-PCR各组Ct值表明,人阴道上皮细胞VK2/E6E7中构成性表达Dectin-1、Syk mRNA。热灭活白色念珠菌与VK2/E6E7共孵育24h后,细胞Dectin-1的表达明显上调(P<0.01);48h后表达量下降。下游衔接分子Syk的表达趋势与Dectin-1一致。
　　第二部分:洁泽1号对VK2/E6E7 Dectin-1、Syk表达的影响
　　1.洁泽1号、小檗碱、酵母聚糖对VK2/E6E7的细胞毒性实验
　　洁泽1号对VK2/E6E7的IC10为10.792mg/ml,作用时间为24小时;小檗碱对VK2/E6E7的IC10为3.626μmol/L,作用时间为12小时;酵母聚糖对VK2/E6E7的IC10为51.978mg/ml,作用时间为12小时。
　　2.洁泽1号对VK2/E6E7模式识别受体Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响
　　Dectin-1的表达情况如下:模型组与正常组相比,Dectin-1表达升高,统计学具有显著性差异(P<0.01);洁泽1号组、小檗碱组、酵母聚糖组Dectin-1表达较模型组降低,统计学具有显著性差异(P<0.01);小檗碱组、酵母聚糖与洁泽1号组之间Dectin-1表达无统计学差异(P>0.05)。
　　Syk的表达趋势与Dectin-1一致,即与正常组相比,模型组Syk表达升高,统计学具有显著性差异(P<0.01);洁泽1号组、小檗碱组、酵母聚糖组Syk表达较模型组降低,统计学具有显著性差异(P<0.01);小檗碱组、酵母聚糖与洁泽1号组之间Syk表达无统计学差异(P>0.05)。
　　结论：
　　1.VK2/E6E7中构成性表达Dectin-1、SykmRNA。
　　2.热灭活白色念珠菌可上调VK2/E6E7模式识别受体Dectin-1的表达,其衔接分子Syk的表达也随之上调,说明热灭活白色念珠菌可被VK2/E6E7表面Dectin-1识别,并通过Syk依赖性途径介导固有免疫反应。Dectin-1在识别白色念珠菌和启动宿主免疫防御中起重要作用。
　　3.洁泽1号能下调感染白色念珠菌VK2/E6E7模式识别受体Dectin-1及衔接分子Syk的表达,可能因此导致其下游炎性因子分泌减少,限制局部炎症反应。

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前言

第一部分：白色念珠菌对Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响

实验材料和方法

1．实验材料

2实验方法：

结果

附图

结论

第二部分：洁泽1号对阴道上皮细胞模式识别受体Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响

实验材料与方法

1 实验材料

2方法

结果

1 洁泽1号、小檗碱、酵母聚糖对VK2/E6E7细胞毒性实验

2 洁泽1号对VK2/E6E7 模式识别受体Dectin-1及其衔接分子Syk表达的影响

结论

讨论

参考文献

综述

致谢