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PDCD5在胆道闭锁患儿胆管组织中的表达及意义

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前言

材料和方法

1 样本收集和临床资料

2 实验材料

2.1实验试剂

2.2 实验设备(表1)

2.3实验耗材

3 实验方法

3.1 胆道闭锁和胆总管囊肿肝脏组织中总RNA提取

3.2实时荧光定量PCR(RT—PCR)检测PDCD5的表达:

4 Western Blotting 检测胆道闭锁患儿胆管组织中PDCD5的蛋白表达水平

4.1 Western Blotting的基本原理

4.2 Western Blotting的操作步骤

5 统计学处理

结果

1. RT-PCR检测结果、溶解曲线和数据处理

2 Western Blotting检测结果与数据分析

讨论

参考文献

综述

附录 攻读硕士学位期间参与的课题及发表论文目录

致谢

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摘要

目的:研究促凋亡基因PDCD5在胆道闭锁及胆总管囊肿患儿胆管组织中的表达规律,探讨促凋亡基因PDCD5在胆道闭锁患儿胆管组织中的异常表达及意义。
  方法:分别取8例胆道闭锁(Biliary Atresia BA)患儿胆管组织和8例胆总管囊肿(choledochal cys tCC)患儿胆管组织,应用蛋白质印迹(western blotWB)与荧光实时定量(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)的方法分别检测PDCD5在胆道闭锁患儿胆管组织与胆总管囊肿患儿胆管组织中的表达,对其表达进行定位和定量,并比较分析。
  结果:PDCD5在BA组胆管组织中mRNA转录水平的CT值为(4.0125±1.0735),明显低于CC组的CT值(6.7292±1.169)(P﹤0.05)。上述数据表明:PDCD5在BA组胆管组织中mRNA转录水平明显高于对照组;western b1ot结果显示,PDCD5在BA组胆管组织中蛋白表达量明显高于CC组。
  结论:PDCD5在胆道闭锁患儿胆管细胞中的蛋白和基因水平表达均增强。PDCD5可能参与胆道闭锁的胆管细胞的凋亡从而参与胆道闭锁的炎性反应,在胆道闭锁的发病机制中发挥重要作用。

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