MiR-145抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的机制研究

摘要

目的:研究microRNA-145(miR-145)对人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响;探寻miR-145可能通过调控ADAM17进而发挥抗肿瘤血管生成的作用机制。
　　方法:通过转染miR-145模拟物和无意义的阴性对照小RNA序列进入人脐静脉血管内皮细胞,使用细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测转染miR-145模拟物的实验组和转染无意义的阴性对照小RNA序列的对照组的HUVECs的增殖能力,Transwell小室检测转染后的实验组和对照组HUVECs的迁移能力。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测预测的miR-145候选靶基因ADAM17的mRNA表达水平,并通过免疫印迹(Western blot)从蛋白水平检测ADAM17的表达。
　　结果:转染48h后,转染阴性对照小RNA序列组的吸光度(A值)(0.44±0.01)明显高于转染miR-145模拟物组的A值(0.34±0.01)(P<0.01);转染72h后,转染阴性对照小RNA序列组A值(0.86±0.05)也明显高于转染miR-145模拟物组的A值(0.60±0.09)(P<0.01)。转染无意义的阴性对照小RNA序列组的HUVECs迁移穿过transwell小室膜的细胞数(205±30个)明显多于转染miR-145模拟物组穿过小室膜的细胞数(135±6个)(P<0.05)。转染miR-145模拟物组较转染无意义的阴性对照小RNA序列组的ADAM17基因的蛋白水平和mRNA均呈现下调,Western blot灰度值为0.65±0.21,(P<0.05);RT-PCR的相对值0.34±0.15,(P<0.01)。
　　结论:miR-145能够显著抑制人血管内皮细胞的迁移和增殖能力,且miR-145可通过调节ADAM17基因的表达从而实现调控血管内皮细胞迁移和增殖功能。

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前言

材料和方法

1． 实验材料

2．实验方法与步骤

3. 统计学处理方法

实验结果[1]

1. 过表达miR-145抑制HUVECs细胞的增殖能力

2. 过表达miR-145抑制HUVECs细胞的迁移能力

3. 过表达miR-145对HUVECs中ADAM17 mRNA表达的影响

4. miR-145对HUVECs中ADAM17 蛋白表达水平的影响

讨论

参考文献

综述

参考文献

附录英、汉名词对照

致谢