DRD5,MNX1异常甲基化在2型糖尿病大血管并发症诊断中的应用研究

摘要

目的：
　　研究多巴胺受体5(DRD5),运动神经元和胰腺同源盒1(MNX1)基因甲基化与2型糖尿病大血管并发症的关系以及DRD5,MNX1基因甲基化在2型糖尿病大血管并发症诊断中的应用。
　　方法：
　　利用甲基化芯片技术对9例患者(糖尿病合并冠心病组(DC),糖尿病脑卒中组(DS)及糖尿病无并发症组(DNC)各3例)行全基因组甲基化分析,从具有组间甲基化差异的基因中挑选出钙离子通道相关基因DRD5和胰腺发育相关基因MNX1。随后挑选2012年2月至2012年6月于协和医院住院的2型糖尿病患者24例,其中合并冠心病患者8例,合并脑卒中患者8例,无任何并发症患者8例,以及正常人(NC)8例,年龄30-68岁,男性19名(60％),女性13名(40%)。然后用甲基化特异性PCR(MSP),实时定量PCR(RT-PCR),酶联免疫吸附测定(ELISA)技术在所有24例实验对象中对DRD5,MNX1基因的甲基化水平进行验证。
　　结果：
　　1、基因DRD5甲基化芯片结果显示DRD5在DNC中呈低甲基化状态,在DC中部分呈现高甲基化状态,在DS中呈高甲基化状态。MSP结果显示,DRD5在DNC及NC中呈低甲基化状态,在DS中呈高甲基化状态,在DC中也是以高甲基化状态为主。RT-PCR结果显示DRD5mRNA在DS中表达低,与其相比,DNC及NC表达明显升高(P值分别为P<0.001,P=0.03);DC与DNC相比,DRD5mRNA表达明显降低,P<0.001。ELISA检测血浆中DRD5蛋白含量结果显示在DS中含量低,与其相比,DNC及NC表达明显升高(P值分别为0.002,0.017),DS与DNC相比,DRD5表达明显降低,P=0.011。
　　2、基因MNX1甲基化芯片结果显示MNX1在DC中呈高甲基化状态,在DS中呈低甲基化状态。MSP结果显示,MNX1在DC中呈高甲基化状态,在NC中也主要是呈高甲基化状态,在DS中呈低甲基化状态。RT-PCR结果显示MNX1mRNA在DS中表达最高,与其相比,DC,DNC及NC表达明显降低(P值分别为P=0.001,P<0.001,P<0.001)。ELISA检测血浆中MNX1蛋白含量结果显示在DS中含量最高,与其相比,DC,DNC及NC表达明显降低(P值分别为0.029,0.002,0.001)。
　　结论：
　　在不同的2型糖尿病大血管并发症中,基因DRD5与MNX1启动子区的甲基化水平并不相同,启动子区的甲基化水平参与基因的表达调控。基因DRD5在糖尿病合并卒中人群中呈高甲基化状态,在糖尿病合并冠心病人群中也主要是高甲基化状态,DRD5蛋白的低表达与糖尿病冠心病及糖尿病卒中密切相关;基因MNX1在糖尿病合并卒中人群中呈低甲基化状态,MNX1蛋白的异常高表达与糖尿病卒中密切相关。

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中英文缩略词表

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英文摘要

前言

研究对象与方法

一、 研究对象

二、实验材料

三、研究方法

实验结果

一、甲基化芯片结果

二、基因DRD5的甲基化，mRNA表达及血浆中蛋白水平检测1、DRD5基因的甲基化检测

三、基因MNX1的甲基化，mRNA表达及血浆中蛋白水平检测1、MNX1基因的甲基化检测

讨论

结论

课题研究的创新

参考文献

综述

参考文献

致谢