早期G2/M检测点在人肺腺癌A549细胞低剂量辐射超敏中作用的研究

摘要

【目的】观察细胞周期同步化对人肺腺癌A549细胞低剂量超敏的影响,探索早期G2/M检测点在G2期富集的A549细胞的HRS/IRR转变中的作用特点。
　　【方法】以人肺腺癌A549细胞株(HRS/IRR+)为对象,aphidicolin同步化细胞于G2期;克隆形成实验检测非同步化/同步化A549细胞受到低剂量辐射后的存活分数,MIRM模型分析拟合各参数并绘制生存曲线;Phospho-histoneH3染色流式细胞技术检测受辐射的G2期A549细胞的周期进程;免疫荧光检测DNA双链断裂(DSBs)标志物γ-H2AX荧光焦点的动态变化评估G2期A549细胞的DNA修复效率。
　　【结果】与非同步化的A549细胞相比,G2期富集的A549细胞的HRS现象更加显著,HRS/IRR的转变剂量与早期G2/M检测点的剂量响应模式符合;G2期富集的A549细胞的早期G2/M检测点的激活需要一个阈值剂量(大于0.4Gy),低于该阈值剂量则早期G2/M检测点功能缺失,表现为低剂量超敏(HRS);早期G2/M检测点的激活和维持需要一定的DNA损伤水平(约15个DSBs),随着修复的进行,DSBs低于该阈值,阻滞释放而细胞重新进入细胞周期。
　　【结论】(1)低剂量辐射超敏可以通过细胞周期同步化的方法得到增强;(2)G2期A549细胞的早期G2/M检测点的激活需要一个阈值剂量;(3)G2期A549细胞的早期G2/M检测点的激活及维持需要一定的DNA损伤水平。

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引言

材料与方法

一 主要仪器与耗材

二 主要试剂

三、常用试剂配制

四、实验方法

1. 细胞培养

2．细胞周期同步化

3．照射方法

4. 克隆形成实验

5. 流式细胞仪检测细胞周期进程

6. 激光共聚焦免疫荧光实验

7.统计学分析

实验结果

一、G2期同步化结果

1. aphidicolin的最佳药物浓度

二、G2期富集的A549细胞的HRS应答增强

三、G2期富集的A549细胞的早期G2/M检测点的剂量响应特点

四、早期G2/M检测点与DNA DSBs水平

讨论

结论

参考文献

综述

致谢