bFGF和EGF在大鼠皮肤及移植口腔粘膜创伤修复中的表达

摘要

背景:在伤口愈合过程中,通常会形成瘢痕,人类口腔黏膜的创伤修复同皮肤创伤比较愈合快,形成的瘢痕组织少。因此,口腔黏膜为我们提供了成体组织无瘢痕创伤修复的研究主体,其创伤愈合过程能够为皮肤创伤修复的改善提供有价值的信息。创伤修复的每个时期都是生长因子,细胞,细胞外基质之间相互作用的结果。生长因子对细胞和细胞外基质起重要作用。本课题首先将大鼠口腔黏膜移植至大鼠腹部,待伤口愈合后,在移植部位和对侧对应部位制备切伤,伤后不同时间段取创伤部位标本,检测bFGF和EGF的表达情况,探寻皮肤、移植后的口腔黏膜自然创伤过程以及改变生长环境的创伤修复过程中bFGF和EGF的作用。
　　目的:研究改变基质环境的口腔粘膜和皮肤创伤修复过程中的相关生长因子bFGF和EGF的表达情况,为临床上瘢痕的防治,提高创面愈合质量提供依据。
　　材料与方法:将大鼠舌部口腔黏膜移植至大鼠右侧腹部皮肤,移植后3周,在移植部位和对侧对照部位制备大鼠皮肤全层切伤模型,并于伤后0h,12h,1d,2d,3d,4d,5d,6d以及7d处死大鼠,采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学的方法,从基因和蛋白质表达水平研究细胞因子bFGF和EGF的表达情况。
　　结果:1.创伤模型建立后,伤口的愈合时间实验组快于对照组,实验组愈合瘢痕小而对照组瘢痕相对较大,两组伤口在一周后均愈合,情况良好,无不良愈合情况。
　　2.实时定量PCR结果显示:实验组bFGF在创伤后12h明显表达增强(P≤0.05),同对照组比较有统计学差异。1d时几乎未表达,而3d时表达同对照组相似。实验组EGF在创伤后3d内表达较低,3d至5d时表达逐渐增强,至5d时实验组表达明显增强与对照组有显著差异(P≤0.05)。
　　3.免疫组织化学结果显示:bFGF表达广泛,在上皮层及真皮层中均可见。在伤后12h时,实验组表达明显高于对照组(P≤0.05),后表达逐渐降低,而至3d至7d内,同对照组表达水平相当,与实时定量PCR结果一致。EGF主要表达于上皮层。在伤后3d内,两组表达均较低(P≥0.05),在5d时,实验组染色颗粒深于对照组且表达较多(P≤0.05),而在7d时,实验组表达量明显低于对照组(P≤0.05)。
　　结论:1.bFGF在创伤后24h表达明显增强,说明舌粘膜的创伤修复过程中bFGF的迅速表达对于降低瘢痕的愈合以及指导EGF的表达,共同促进伤口的愈合有重要意义。之后随着伤口的逐渐愈合表达逐渐下降。表明bFGF在创伤愈合过程中可趋化并促进创伤修复细胞迁移和增值,促进新生血管形成。
　　2.EGF在创伤后开始到第3天开始一直处于低表达状态,后表达增强,至第5天时实验组与对照组有明显区别,这提示我们EGF的作用可能滞后,其在伤口肉芽组织增生,毛细血管形成后再主导发挥作用,促进伤口愈合。其在促进表皮细胞,成纤维细胞和内皮细胞增殖,诱导角膜细胞和内皮细胞向创面迁移中发挥积极作用,在促进损伤修复中扮演重要角色。
　　3.实时定量PCR的结果和免疫组化的结果基本相符和,表明在基因水平的表达趋势与免疫组化染色结果所示的蛋白表达趋势基本一致。