Treg及IL-4对重症急性胰腺炎时枯否细胞M2极化状态的调节作用

摘要

目的：
　　探讨雨蛙肽联合脂多糖诱导小鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)的方法和Treg(CD4+CD25+FoxP3+T调节淋巴细胞)及IL-4(白介素-4)对重症急性胰腺炎时枯否细胞(Kupffercells)M2极化状态的调节作用,并对二者的作用进行比较。
　　方法：
　　1.正常组为小鼠腹腔注射生理盐水(NS);SAP组为腹腔注射雨蛙肽联合脂多糖。SAP组分三组:造模后9h、12h和24h组,比较该三组与正常组胰腺组织病理变化。2.比较正常组与模型组(SAP8h+NS组)肝脏炎症因子的基因表达水平。3.模型组按照尾静脉注射溶液的不同分三组:①重症急性胰腺炎生理盐水对照组(SAP16h+NS组);②重症急性胰腺炎IL-4治疗组(SAP16h+IL-4组);③重症急性胰腺炎Treg治疗组(SAP16h+Treg组)。实时荧光定量RT-PCR检测肝脏炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-10mRNA表达水平;免疫荧光技术检测肝脏枯否细胞不同状态的标志性蛋白CD163、CCR7的表达。
　　结果：
　　(1)HE病理结果证实造模24h后胰腺细胞水肿、间质水肿,浸润的炎症细胞较其他组明显增多,并可见部分胰腺腺细胞片状坏死。(2)模型组IL-1β、TNF-αmRNA的表达显著高于正常组(P<0.1)。(3)重症急性胰腺炎Treg治疗组和重症急性胰腺炎IL-4治疗组IL-1βmRNA的表达显著低于重症急性胰腺炎生理盐水对照组(P<0.1));重症急性胰腺炎Treg治疗组IL-1βmRNA的表达显著低于重症急性胰腺炎IL-4治疗组(P<0.05);重症急性胰腺炎Treg治疗组、重症急性胰腺炎IL-4治疗组TNF-αmRNA的表达显著低于重症急性胰腺炎生理盐水对照组(P<0.1);重症急性胰腺炎Treg治疗组TNF-αmRNA的表达显著低于重症急性胰腺炎IL-4治疗组(P<0.1);重症急性胰腺炎IL-4治疗组的IL-10mRNA的表达显著高于重症急性胰腺炎生理盐水对照组和重症急性胰腺炎Treg治疗组(P<0.1)。
　　结论：
　　雨蛙肽联合脂多糖成功诱导小鼠SAP。由于枯否细胞在SAP病情发展中起着重要作用,IL-4和Treg促进枯否细胞M2极化,下调了TNF-α、IL-1β和CCR7,上调了IL-10和CD163,提示IL-4和Treg对SAP具有一定的治疗作用。

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封面

声明

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中文摘要

英文摘要

引言

材 料 与 方 法

主要试剂

实验仪器

动物分组及处理

重症急性胰腺炎模型与正常组的制备

Treg的提取

对照组、IL-4、Treg治疗组制备及标本采集

胰腺和肝脏组织病理学检测

1、脱蜡至水的步骤：

2、染色步骤：

3、脱水封片步骤：

肝内TNF-alpha，IL-1β，IL-10表达水平的检测：

1. RNA的提取：

2. RNA含量测定：

3. cDNA的合成：

4. PCR反应：

统计学分析

结果

造模24h后重症急性胰腺炎动物模型成功

模型组肝脏炎症因子表达上调

IL-4促使M1枯否细胞向M2枯否细胞转化

Treg促使M1枯否细胞向M2枯否细胞转化

Treg较IL-4促使M1枯否细胞向M2枯否细胞转化作用显著

讨论

参考文献

综述

附录

致谢