LIN-10与HIF-1介导的缺氧神经损伤的相关性初步研究

摘要

实验目的：通过细胞遗传学的方法,观察VAMP,LIN-10,RAB-3,SNG-1在缺氧条件下的表达变化,从而明确缺氧引起神经损伤的作用部位并筛选出缺氧相关因子;观察筛取出的缺氧相关因子LIN-10与经典缺氧因子HIF-1之间是否存在相关性,为后续深入研究缺氧导致神经损伤的具体分子机制奠定基础。
　　设计时间及地点细胞生物学试验,于2011年9月—2012年2月于美国斯坦福大学生命科学系ShenLab完成。
　　材料：本实验中所有涉及的突变实验动物,实验试剂,实验仪器等均来自美国斯坦福大学ShenLab。
　　方法：本实验可基本分为两个部分,第一部分为缺氧相关因子的筛选,即将含有候选因子的转基因实验动物分别置于低氧及常氧环境下培育后,在共聚焦显微镜下观察其在神经元的表达情况,从而筛选出目的因子。第二部分为已筛选出的目的因子LIN-10与HIF-1的相关性研究,将已筛选出的缺氧相关因子LIN-10通过显微注射的方法转基因至含有hif-1突变的相关实验动物体内,在共聚焦荧光显微镜下观察其在神经元的表达情况。
　　结果：在缺氧相关基因筛选实验中,实验组缺氧条件下培养的kyIs235(-)在尾部两侧神经元内的LIN-10荧光标记基本消失,而与其相应的对照组常氧条件下kyIs235(+)在相同部位荧光标记亮度显著;其余候选因子的实验组与对照组内未见明显差异。在LIN-10与HIF-1的相关性研究中,在含有hif-1突变基因的实验组动物神经元中未见明显LIN-10荧光标记,而在不含有hif-1突变基因的实验动物神经元中可见明显LIN-10荧光标记表达。
　　结论：缺氧会引起LIN-10的表达变化,而在hif-1的突变个体中LIN-10的细胞学定位也会发生类似变化。但是在缺氧条件下LIN-10与HIF-1之间具体作用机制有待后续实验证实。

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英文摘要

1 实验对象及试剂仪器

1.1实验对象

1.1.1 候选筛查突变动物实验动物编号

1.1.2 HIF-1相关突变动物

1.2主要实验试剂及仪器

2理论分析

3 实验研究

3.1实验材料

3.2实验方法

3.2.1 缺氧相关基因的筛查

3.2.2 LIN-10与HIF-1的相关性研究

3.3实验结果

3.3.1 缺氧相关基因筛查

3.3.2 LIN-10与HIF-1的相关性研究

4实验结果分析

4.1缺氧相关基因筛查分析

4.2 LIN-10与HIF-1的相关性实验分析

5 讨论

参考文献

综述

附录

致谢