Sonic hedgehog蛋白对永久性脑缺血的大鼠血脑屏障的保护作用及机制研究

摘要

目的：Shh蛋白对永久性脑缺血大鼠血脑屏障的保护及其机制的研究
　　方法：采取改良线栓法制作SD大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型（MCAO），术后立即进行侧脑室注射并分别给予rHuShh（Shh组）、PBS（PBS组）、rHu Shh+Cyclopamine（Shh+ Cyc组），并于1天后观察神经行为缺损评分，采用干湿称重法检测模型大鼠脑水肿，应用依文斯蓝外渗法检测血脑屏障通透性，TTC法检测模型梗塞面积，应用实时荧光定量PCR检测梗塞灶边缘区Ang-1及血脑屏障相关分子（ZO-1, occludin, claudin-5）的mRNA表达水平，免疫印迹法检测上述分子表达水平。原代培养星形胶质细胞和大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs），应用糖氧剥夺模拟体外缺血模型，给予Shh、PBS、Shh+ Cyc预处理，4小时后采用ELISA检测Ang-1表达水平，分别应用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测Ang-1及血脑屏障相关关键分子（ZO-1、occludin、claudin-5）的mRNA和蛋白表达水平。
　　结果：（1）侧脑室注射Shh可以显著减轻脑缺血导致的神经功能缺损，减轻脑水肿，降低血脑屏障通透性，减小梗塞面积；Shh导致缺血梗塞区边缘ZO-1,occludin、claudin-5、Ang-1的mRNA水平和蛋白水平的表达增高；Cyc可以逆转Shh对上述分子的表达调控及对血脑屏障的保护作用；（2）Shh可显著升高OGD处理的原代星形胶质细胞Ang-1的表达及分泌水平； Shh可提高OGD处理BMECs中ZO-1, occludin、claudin-5、Ang-1的mRNA水平和蛋白水平的表达，应用Ang-1抗体可以逆转Shh对脑微血管内皮细胞的作用。
　　结论：外源性Shh可促进星形胶质细胞分泌Ang-1作用于脑微血管内皮细胞，增加ZO-1, occludin,、claudin-5的表达，减少血脑屏障破坏及渗漏。

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二、结果

三、讨论

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