泛福舒通过TLR4和TLR2介导的ERK1/2/NF-κB通路上调RAW264.7细胞炎症因子的表达

摘要

目的：泛福舒（OM85-BV）是一种含8种常见呼吸道病原菌的冻干溶解物，通过调节巨噬细胞的活性和细胞因子的产生，在抗感染免疫中发挥重要作用。本研究主要探讨泛福舒对小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症因子的调节作用及相关机制研究。
　　方法：体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞，（1)泛福舒分别以不同的时间点及不同的浓度梯度刺激RAW264.7细胞，用RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β，IL-6和TNF-αmRNA和蛋白的表达；细胞免疫荧光检测RAW264.7细胞表面TLR4和TLR2表达情况；用小分子siRNA干扰技术分别沉默TLR4，TLR2，MyD88和TRAM基因的表达，RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β，IL-6，TNF-αmRNA及蛋白的表达变化；（2）泛福舒以不同时间点刺激RAW264.7细胞，Western Blot检测AKT，ERK1/2，P38的磷酸化水平；用AKT，ERK1/2，P38特异性抑制剂Ly294002，U0126和SB203580分别刺激RAW264.7细胞，RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β，IL-6，TNF-α mRNA和蛋白的表达变化；用小分子siRNA干扰技术分别沉默TLR4，TLR2，MyD88和TRAM基因的表达，Western Blot检测AKT，ERK1/2，P38的磷酸化水平变化；（3）泛福舒以不同时间点刺激RAW264.7细胞，Western Blot检测P65，IκB的磷酸化水平及细胞核和细胞质P65蛋白表达变化；用NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082刺激RAW264.7细胞，RT-PCR和ELISA分别检测IL-1β，IL-6，TNF-α mRNA和蛋白的表达变化；siRNA干扰技术分别沉默TLR4，TLR2，MyD88和TRAM基因的表达，Western Blot检测P65及IκB磷酸化水平变化。
　　结果：（1）泛福舒上调RAW264.7巨噬细胞IL-1β，IL-6，TNF-αmRNA和蛋白的表达，并呈时间和浓度依赖的方式；分别沉默TLR4，TLR2，MyD88和TRAM基因后，泛福舒诱导的IL-1β，IL-6，TNF-αmRNA和蛋白表达下调；（2）泛福舒增强RAW264.7巨噬细胞ERK1/2磷酸化水平，但对AKT，P38磷酸化水平没有影响；U0126可以部分阻断泛福舒诱导的IL-1β，IL-6，TNF-αmRNA和蛋白的表达；分别沉默TLR4，TLR2，MyD88和TRAM基因后，泛福舒诱导的ERK1/2磷酸化水平下调；（3）泛福舒增强RAW264.7巨噬细胞P65和IκB磷酸化水平，诱导P65核转位；用Bay11-7082可以部分阻断泛福舒诱导的IL-1β，IL-6，TNF-αmRNA和蛋白的表达；分别沉默TLR4，TLR2，MyD88和TRAM基因后，泛福舒诱导的P65和IκB磷酸化水平下调。
　　结论：泛福舒通过TLR4和TLR2介导的ERK1/2/NF-κB通路上调RAW264.7巨噬细胞IL-1β，IL-6和TNF-α的表达。

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前言

参考文献

第一部分 泛福舒通过TLR4/TLR2通路诱导IL-1β，IL-6和TNF-α的产生

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分 泛福舒通过ERK1/2通路诱导IL-1β，IL-6和TNF-α的产生

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

第三部分 泛福舒通过NF-κB通路诱导IL-1β，IL-6和TNF-α的产生

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

结论

综述

参考文献

附录

致谢