经方下瘀血汤调控ACE2介导的RAS自稳抑制肝纤维化进展的实验研究

摘要

背景：肝纤维化是各种病因所引起的慢性肝损伤所共有的病理改变。如无有效的治疗措施干预，容易进一步恶化为肝硬化出现肝脏功能衰竭，甚至发展为肝癌。肾素-血管紧张素系统（RAS）在肝纤维化形成中起着非常重要的作用。研究显示RAS经典的ACE-AngⅡ-AT1R通路活化促进肝纤维化形成，而新的RAS通路ACE2-Ang(1-7)-Mas则对肝纤维化形成起抑制作用，两者相互作用调节肝纤维化的进程。ACE2作为关键的调控因子调控RAS两条通路的平衡。尽管相关研究证实ACEi类及ARBs类药物对缓解肝纤维化进展有效，但其对肝病患者血压及肾灌注的不良影响限制了这些药物在肝纤维化防治中的广泛应用。尤其是Sipahi等2010年在《柳叶刀·肿瘤学》上提出AT1R拮抗剂的使用与近年来肿瘤发病率升高有关，更是增加了AT1R拮抗剂使用的顾虑。然而，相关研究证实ACE2的增加不影响正常动物的血压及组织重建，人类重组ACE2制剂对肝纤维化模型动物治疗有效，且在一期临床试验中对健康志愿者未见明显副作用。因此，以ACE2为切入点，恢复或重建RAS自稳平衡成为肝纤维化防治的新亮点。我国应用中医药治疗肝纤维化有效且其对肝病患者的血压及肾灌注无明显副作用，在国际学术界独树一帜。临床研究显示，经典方剂下瘀血汤对延缓肝纤维化进展有良效，然而其抗肝纤维化的具体机制尚在不断探索中。
　　目的：探讨经方下瘀血汤是否通过恢复或重建RAS的自稳平衡抑制肝纤维化进展。
　　方法：27只Wistar大鼠随机分为5组，即正常对照组、去除病因组、下瘀血汤组、科索亚组和模型组。除正常对照组外，各实验组大鼠背部皮下注射2.5mL/kg40％CCL4橄榄油混悬液造模，以下瘀血汤及科索亚干预肝纤维化进展，通过HE染色、Masson三色胶原染色和超微病理学方法观察肝脏组织结构的改变。采用免疫组织化学染色法、RTQ-PCR及Western blot法检测RAS相关因子的基因和蛋白表达情况。
　　结果：病理结果显示：1、去除病因组、下瘀血汤组、科索亚组和模型组肝纤维化程度依次加重。2、正常组RAS各分子基因及蛋白表达均低于其他组，除去除病因组与正常组比较TGFβ1基因表达无统计学意义（P>0.05）之外，其他组间比较均具有统计学意义(P<0.05)。而模型组RAS各分子的基因及蛋白表达则高于其他组(P<0.05)。3、经方下瘀血汤治疗组ACE2的基因及蛋白上调水平(P<0.05)高于科索亚组；而AngⅡ及TGF-β1的基因及蛋白表达水平低于科索亚组(P<0.05)；ACE蛋白表达水平低于科索亚治疗组(P<0.05)，ACE的基因表达水平与科索亚组无显著性差异(P>0.05)；AT1R基因表达高于科索亚组，但是差异不显著(P>0.05)，AT1R蛋白表达水平高于于科索亚治疗组(P<0.05)。
　　结论：经方下瘀血汤可能是通过增加ACE2的表达，抑制ACE、AngⅡ和AT1R的表达,从而使RAS中促进肝纤维化进展的经典通路ACE-AngⅡ-AT1R占优势转变为抑制纤维化的ACE2-Ang（1-7）-Mas受体轴占优势，从而抑制肝纤维化进展，即调控以ACE2为介导的RAS自稳可能是经方下瘀血汤抑制肝纤维化进展的深层机制之一。

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第一部分疏肝、祛湿、化瘀、养阴四法对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响

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前言

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分经方下瘀血汤调控ACE2介导的RAS自稳抑制肝纤维化进展的实验研究

前言

实验研究

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述一

参考文献

综述二

参考文献

附录1（攻读硕士学位期间发表论文目录）

致谢