下瘀血汤抑制胶质细胞源性神经营养因子抗肝纤维化的作用机制

摘要

目的 探讨下瘀血汤是否通过抑制胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)发挥抗肝纤维化的作用.方法 24只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、下瘀血汤组,每组各8只.模型组和下瘀血汤小鼠腹腔注射10％CCl4,第4周开始下瘀血汤组小鼠给予0.4678 g/kg下瘀血汤灌胃.检测肝功能指标ALT、AST水平,观测肝脏组织病理形态学.免疫组化检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及GDNF蛋白表达.GDNF(10 ng/ml)处理GFP-Col-HSC和人原代肝星状细胞(HSC),检测HSC活化.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 模型组ALT和AST水平较对照组显著升高,下瘀血汤组ALT和AST水平较模型组显著降低(P值均<0.01).肝组织病理学显示,模型组炎症细胞浸润明显,增生的胶原纤维形成纤维间隔,下瘀血汤组胶原纤维间隔较疏松及炎症细胞浸润减轻.免疫组化显示,与对照组相比,模型组α-SMA及GDNF阳性表达显著升高(P值均<0.01),均分布在纤维间隔,下瘀血汤组 α-SMA与GDNF表达较模型组均显著降低(P值均<0.05).免疫印迹结果显示,对照小鼠肝组织GDNF表达比较低,CCl4造模6周肝纤维化形成,GDNF表达上调10倍左右,下瘀血汤显著抑制模型小鼠GDNF蛋白表达(P值均<0.01);α-SMA和Ⅰ型胶原α1(Col1)表达在肝纤维化模型小鼠显著上调,下瘀血汤处理后α-SMA与Col1显著下降(P值均<0.01).体外结果显示,GDNF可诱导HSC细胞α-SMA及Ⅰ型胶原α1蛋白表达显著上调,而下瘀血汤对此有显著抑制作用(P值均<0.01).结论 肝纤维化形成中GDNF表达显著上调,GDNF可诱导HSC活化,下瘀血汤可抑制GDNF从而抗肝纤维化.