p21激活激酶1的激活肽段对血管紧张素Ⅱ所诱导的心肌肥厚与心律失常的抑制与改善作用

摘要

目的:探讨p21激酶1的激活肽段在体内和体外对血管紧张素Ⅱ引起的心肌肥大及相关心律失常的作用。
　　方法:p21激活激酶1的激活肽段（PAP）TSNSQKYMSFTDKSA来自于p21激活激酶自抑制区并且被连接到来源于人类免疫缺陷病毒-1反式激活的调控蛋白的十一氨基酸序列YGRKKRRQRRR上。肽段YGRKKRRQRRRGTSNSQKYMSFTDKSA合成于美国伊利诺依大学芝加哥分校研究中心，并被质谱分析证实。乳鼠心肌细胞分离自新生一至两天的大鼠，乳鼠心肌细胞培养在层粘连蛋白处理过的玻片上。为了研究PAP在乳鼠心肌细胞内对血管紧张素II引起的心肌肥大的作用，分别用伴有或者不伴有PAP的血管紧张素II刺激乳鼠心肌细胞，未经任何处理的乳鼠心肌细胞用作对照，细胞培养48小时后将细胞取出，倒掉培养液，一部分细胞用福尔马林固定，封闭肌动蛋白α抗体后用荧光显微镜拍片，另一部分细胞收集后用裂解液裂解细胞，提取蛋白质，测定蛋白浓度，然后用于免疫印迹实验。本实验选择体重在22.0～27.9g，3个月左右大小的雄性C57BL/6小鼠（Wild Type，WT）为实验对象，将小鼠随机分为3组，描记心电图后记录PR间期，P波时长，QRS间期以及QT间期，然后分别使用渗透微型泵给予使用血管紧张素Ⅱ、血管紧张素Ⅱ伴有PAP、生理盐水，一周以后再次描记心电图，使用颈椎脱位的方法处死老鼠，切除称量心脏重量（HW），测量胫骨长度（TL）计算其比值（HW/TL）。将取出的心脏主动脉插管后装在Langendorff系统上瀼注心脏，分别使用程序电刺激S1S2和分级递增法S1S1电刺激左心室，使用多电极阵列绘制左心室心外膜电流图，并且记录左心室发生室性心律失常或者心室颤动的电流大小。瀼注结束后将心脏取下OCT冰冻并切片，使用HE染色分析计算细胞平均大小；使用免疫荧光抗体检测连接蛋白43的形状及分布。
　　结果：1.p21激活激酶1的激活肽段在心肌细胞中可以增强p21激活激酶活性。
　　2.p21激活激酶1的激活肽段可以在体内和体外抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌
　　肥大并在血管紧张素Ⅱ引起的心律失常中起保护作用。
　　3.PAPs可以改善血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥厚相关性钙火花和钙波以及非同步钙瞬变
　　结论:p21激活激酶1的激活肽段可以在C57BL/6野生型小鼠体内外抑制血管紧张素酶Ⅱ引起的心肌肥大及相关心律失常，它很有可能是通过多个途径作用于室性心律失常的基质和触发因素从而发挥抗室性心律失常的作用。实验结果表明，通过生物活性肽段激活P21激活激酶可能是一种治疗心肌肥大和室性心律失常的新的途径。

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