慢性间歇缺氧导致高血压的相关机制研究：AT1R的表达影响及相关信号通路

摘要

第一部分血管紧张素I型受体在慢性间歇缺氧中的表达及相关通路
　　目的：阻塞型睡眠呼吸暂停是由于上气道阻塞导致睡眠状态下呼吸反复暂停，并可导致高血压的发生的一种常见疾病。血管紧张素I型受体（AT1R）可与血管紧张素II结合参与调节水钠平衡和血压，故而在高血压的发生发展中起着重要作用。本部分实验目的在于探讨模拟呼吸暂停的间歇缺氧模式下大鼠主动脉AT1R的表达情况及相关通路。
　　方法：随机将24只雄性Wistar大鼠分为对照组、间歇缺氧组及持续缺氧组，每组8只。采用Polygraph System测定大鼠主动脉收缩压，应用免疫组化技术检测各组大鼠主动脉中 AT1R的表达，应用实时定量 PCR定量检测 AT1R及相关信号通路p38MAPK、ERK1/2mRNA表达。培养大鼠主动脉内皮细胞，用Western blot检测主动脉内皮细胞中AT1R、p38MAPK和ERK1/2的蛋白表达，并加入p38MAPK、ERK1/2抑制剂用于进一步研究p38MAPK、ERK1/2在间歇缺氧与AT1R中的作用。各组均数之间比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用t检验。
　　结果：与常氧对照组和持续缺氧组相比，间歇缺氧组大鼠血压明显升高[(114.6±2.8) versus(103.5±2.2) mmHg，t=8.782，P<0.001]；AT1R mRNA及免疫组化蛋白的表达明显高于对照组（分别为t=11.82，P<0.001；t=8.537，P<0.001）；与持续缺氧组比较亦增高（分别为t=6.079，P<0.001；t=4.712，P<0.001）。间歇缺氧组p38MAPK mRNA表达下降（t=2.570，P<0.05），持续缺氧组则无明显变化（t=0.423，P=0.685）。间歇缺氧组ERK1 mRNA表达增加，ERK2mRNA表达减少不明显（分别为 t=6.261，P<0.001；t=0.747，P=0.480），而持续缺氧组则相反ERK1 mRNA表达增加不明显，ERK2 mRNA表达增加明显（分别为t=1.740，P=0.125；t=4.676，P<0.01）。内皮细胞实验Western Blot结果与之类似，间歇缺氧组AT1R蛋白表达明显增高，而持续缺氧组增高不明显（分别为t=6.292，P<0.01；t=0.2.309，P=0.069）；间歇缺氧组磷酸化ERK1/2蛋白表达增高(t=5.847，P<0.01)，而磷酸化 p38MAPK蛋白表达则减少（t=3.010，P<0.05）。在加入ERK1/2的抑制剂PD98059后，AT1R的蛋白减少（t=7.067，P<0.001），而加入p38MAPK的抑制剂SB203580组，AT1R蛋白无明显变化（t=2.078，P=0.092）。
　　结论：AT1R的过度表达在慢性间歇缺氧导致的高血压发生过程中起重要作用，抑制ERK1/2通路可抑制AT1R在间歇缺氧中的过度表达。
　　第二部分肿瘤坏死因子相关受体6在间歇缺氧中的表达及影响
　　目的：睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）是高血压形成的独立危险因素之一，是危害公众健康的重要疾病。而OSAS患者并发的高血压多为顽固性，其比一般高血压对人体健康危害性更大。故而研究OSAS患者易患高血压的发生发展机制即成为本实验目的。方法：Oxycycler model C21高低氧细胞培养箱制备人脐静脉内皮细胞（HUVEC）间歇缺氧模型。应用Western Blot技术检测血管紧张素I型受体(AT1R)、肿瘤坏死因子相关受体6（TRAF6）和MAPK家族信号分子(ERK1/2、p38MAPK)蛋白的表达。利用siRNA技术沉默TRAF6，使用相应抑制剂阻断AT1R、ERK1/2的表达，检测相关通路和对细胞增殖的影响。
　　结果：间歇缺氧下，HUVEC中AT1R、TRAF6和ERK1/2表达增加，p38MAPK表达减少；阻断AT1R表达，TRAF6和ERK1/2表达减少；沉默TRAF6表达，AT1R表达无明显改变而ERK1/2表达明显减少；阻断ERK1/2表达，AT1R表达下降而TRAF6表达无明显改变。另外，间歇缺氧4小时，HUVEC增殖增强；沉默 TRAF6和阻断ERK1/2，可使增殖减慢，而阻断AT1R增殖减慢不明显，无统计学意义。
　　结论：间歇缺氧下，HUVEC中AT1R的表达可能通过AT1R/TRAF6/ERK/AT1R循环通路途径产生；其细胞增殖也可能由TRAF6/ERK途径介导。AT1R/TRAF6/ERK/AT1R循环通路的产生可能是OSAS患者易患顽固性高血压的原因机制之一。

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第一部分血管紧张素I型受体在慢性间歇缺氧中的表达及相关通路

摘要

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1 绪言

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二部分肿瘤坏死因子相关受体6在间歇缺氧中的表达及影响

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1 绪言

2 材料与方法

3 结果

4 讨论

参考文献

综述:OSAS导致高血压的相关因素

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