免疫球蛋白的制备及对小白鼠免疫功能的影响

摘要

以新鲜猪血浆为原料，采用饱和硫酸铵分步盐析法制备免疫球蛋白产品，并研究其对小白鼠免疫功能的影响。 试验一：以IgG的含量为考查指标，比较辛酸法和饱和硫酸铵盐析法的沉淀效果。结果表明，饱和硫酸铵盐析法的沉淀效果优于辛酸法。 试验二：以IgG的含量为考查指标，采用单因素试验和正交试验优化免疫球蛋白的提取条件。单因素试验结果表明：①提取温度为30℃时，IgG的含量最高，达81.75％。②静置时间为45min时，IgG的含量最高，达87.43％。③pH值为7.0时，IgG的含量最高，达81.47％。正交试验结果表明：最佳工艺参数为温度20℃，静置时间45min，pH值7.0，此条件下IgG的含量为88.08％。 试验三：采用环磷酰胺（Cy）建立免疫抑制模型，研究自制IgG 对小白鼠免疫功能的影响，旨在探讨自制的IgG 能否增强小白鼠的免疫力。选用健康的SPF 级昆明种小鼠100 只，雌雄各半，体重18±2g，分为10 个处理组，每组10 只：①正常空白组；②齐墩果酸组；③低剂量IgG 组；④中剂量IgG 组；⑤高剂量IgG 组；⑥空白组+Cy；⑦齐墩果酸组+Cy；⑧低剂量IgG 组+Cy；⑨中剂量IgG 组+Cy；⑩高剂量IgG 组+Cy。③⑧、④⑨、⑤⑩组灌胃剂量分别为45、90、180mg/kgBW，②⑦组灌胃剂量为36mg/kgBW，①⑥组用等体积的生理盐水灌胃。在试验第3 天和第6 天分别给各模型组小鼠腹腔注射Cy 75mg/kgBW。于末次给药后次日，称重，眼眶采血并分离血清，颈动脉放血处死小鼠，取脾脏、胸腺称重，分别计算脾脏指数、胸腺指数；测定小鼠血清中IgG，白蛋白，球蛋白，总蛋白和免疫球蛋白的含量。结果表明： （1）试验动物经Cy 处理后，脾脏和胸腺均明显萎缩，均小于正常空白组，三种剂量的IgG 对此有显著的保护作用，且呈现一定的剂量-效应关系，综合考虑生产成本以低剂量为宜。（2）与正常空白组相比，灌胃IgG 后对Cy所致动物迟发型超敏反应（DTH）低下有显著的对抗作用，但与模型组相比差异不显著。（3）与正常空白组相比，灌胃提取的IgG 能对抗由Cy 所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数的降低，但差异不显著，与模型空白组相比，中剂量IgG组能显著对抗由Cy 所致的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率的降低，但对吞噬指数差异不显著，均未呈现剂量-效应关系。（4）灌胃IgG 后能显著增加小鼠血清中IgG 的含量，与正常空白组相比达显著水平，尤其以高剂量效果最明显；与模型空白组相比，灌胃IgG 后小鼠血清中的IgG含量增加，但差异不显著，且呈现剂量-效应关系，说明提取的IgG在达到一定剂量时可以不同程度的增强小白鼠体液免疫能力，并可显著对抗由Cy 引起的小鼠血清中IgG 含量的降低。（5）与正常空白组相比，灌胃IgG 能显著提高小鼠血清中免疫球蛋白的含量，但未呈现剂量-效应关系；与模型空白组相比，灌胃IgG 后小鼠血清中的IgG 含量增加，但差异不显著，也未呈现剂量-效应关系。（6）与正常空白组相比，灌胃IgG后小鼠血清中球蛋白的含量显著升高，但未呈现剂量-效应关系，与模型空白组相比差异不显著。 试验四：选用健康的SPF级昆明种小鼠80只，雌雄各半，体重18±2g，分为2个处理组，每组40只：①空白对照组；②自制IgG试验组。于试验第1天给②组小白鼠一次性灌胃10g/kgBW自制IgG后，连续观察15天，每周空腹称重一次，并记录小白鼠的死亡情况。结果表明：试验组小白鼠的体增重显著高于对照组，试验期间小鼠无一死亡，证明提取的IgG是无毒的。