联合使用蛋白激酶CK2抑制剂及EGFR-TKIs对人肺腺癌细胞的影响及其机制研究

摘要

目的：探究联合使用蛋白激酶CK2抑制剂及EGFR-TKIs对人肺腺癌细胞的影响及其机制。方法：（1）按实验中不同的药物处理因素将实验分为3组，①单独使用CK2抑制剂琨茜素处理组，②单独使用EGFR-TKIs盐酸埃克替尼处理组、③联合使用琨茜素及盐酸埃克替尼处理组，其中琨茜素及盐酸埃克替尼按浓度剂量1:1联合使用。（2）在不同人肺腺癌细胞系中使用MTT法分别检测上述3组药物处理后细胞增殖作用变化。（3）使用流式细胞学法分别检测上述3组药物处理后对细胞凋亡的影响。（4）使用Western-blot方法检测分别使用上述3组不同因素处理后细胞中EGFR下游信号通路主要蛋白的表达水平及磷酸化水平的变化。结果：（1）琨茜素在人肺腺癌细胞系中具有抑制增殖的作用；(2)琨茜素能够增强盐酸埃克替尼在其耐药细胞系中的增殖抑制作用。在浓度为50μM及100μM情况下，联合使用琨茜素及盐酸埃克替尼对人肺腺癌耐药细胞系H1650，H1975，A549所产生的增殖抑制作用均明显高于单独使用盐酸埃克替尼时(P<0.001，P<0.001;P<0.01，P<0.01;P<0.001，P<0.001)；（3）琨茜素对人肺腺癌细胞具有促进凋亡的作用。（4）琨茜素能够增强盐酸埃克替尼在人肺腺癌细胞中的促进凋亡作用。在药物浓度为50μM及100μM情况下，联合使用盐酸埃克替尼及琨茜素对人肺腺癌耐药细胞系H1650，H1975，A549中所产生的凋亡作用亦较单独使用盐酸埃克替尼有明显升高，差异具有统计学意义(P<0.001，P<0.001;P<0.001，P<0.001;P<0.001，P<0.001)，（5）western-blot结果显示联合使用盐酸埃克替尼及琨茜素后细胞中EGFR下游信号通路中的主要蛋白Akt及ERK磷酸化水平明显减低。结论：在EGFR-TKIs耐药细胞系中，联合使用琨茜素及盐酸埃克替尼能够更显著的抑制细胞中Akt及ERK磷酸化水平，进而产生对盐酸埃克替尼增敏的作用。

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引言

材料与方法

1.本实验所用试剂

2.本实验所用的仪器及耗材

3.常用试剂的配置

4.实验方法

实验结果

1. 实验中所使用的不同的人肺腺癌细胞系，具有不同的EGFR、CK2基础表达状态及EGFR-TKIs敏感性

2. 单药琨茜素、联合使用琨茜素及盐酸埃克替尼对人肺腺癌细胞增殖的影响

3. 单药琨茜素、联合使用琨茜素及盐酸埃克替尼对人肺腺癌细胞系细胞凋亡的影响

4. 在肺腺癌细胞系H1650中分别单独使用琨茜素，EGFR-TKIs以及联合用药对其EGFR下游信号通路的影响

讨论

结论

参考文献

综述： CK2抑制剂：克服肺癌治疗中EGFR-TKI耐药新契机

致谢