超声介导自制纳米泡联合顺铂对小鼠H22肿瘤抑制作用的研究

摘要

第一部分超声联合自制纳米泡对小鼠皮下H22肿瘤抑制作用超声参数的探讨
　　实验目的：探讨超声联合自制纳米泡对小鼠皮下H22肿瘤抑制效果最佳的超声治疗剂量，为今后超声联合微泡介导基因或药物治疗肿瘤奠定理论基础
　　实验方法：建立30只昆明鼠皮下H22肝癌细胞移植瘤模型，随机分为6组。每组予以不同的超声功率和辐照时间：对照组1（予以假辐照治疗），超声治疗组2（1W/cm2+1min）、超声治疗组3（1W/cm2+3min间歇辐照模式，辐照5s，间隔15s，总共3min）、超声治疗组4（1W/cm2+3min，持续辐照3min），超声治疗组5（2W/cm2+1min）、超声治疗组6（2W/cm2+3min）。其它超声治疗参数如频率、占空比等保持一致。麻醉小鼠后固定，每只小鼠尾静脉注射0.1ml相同浓度的自制纳米泡后即刻予以超声辐照，并在治疗前，治疗后即刻、治疗后24h、治疗后72h分别行超声造影（CEUS）检查，运用统计学方法比较各组治疗前后各时间点的增强强度（VI,Video Intensity）的差异，并在治后24h和72h之后各组分别处死2只小鼠进行肿瘤组织切片的HE染色、免疫组化CD31染色进行微血管密度（MVD）计数，运用统计学方法比较各组间的差异。
　　实验结果：
　　（1）除对照组外，各治疗组小鼠肿瘤体积均有减小，但各组间没有统计学意义，对照组小鼠肿瘤体积最大，表面皮肤和内部无坏死组织，但随着治疗功率和治疗时间的增加，较大的治疗剂量组小鼠肿瘤表面皮肤和内部坏死组织增加，并且皮下可见不同程度的出血。
　　（2）CEUS检查，对照组肿瘤各时刻均可见显著的超声显影，而各肿瘤治疗组在超声破坏后即刻超声显影明显减弱，治疗后24h和72h时间点造影图像虽可见部分肿瘤血流灌注恢复，但是与治疗前相比，仍具有明显的差异。
　　（3）与对照组相比：组2、组3在治疗后即刻、24h的VI与组1相比有统计学意义，组4、5、6在治疗后即刻、治疗后24h、治疗后72h的VI与组1相比均有统计学意义。治疗功率相同，而治疗时间不同的组间比较：组2与组3相比VI在治疗后各时刻无统计学意义，说明1W/cm2+1min与1W/cm2+3min间歇辐照组的治疗效果无差异；组2与组4相比VI在治疗后72h有统计学意义，组5与组6相比VI在治疗后24h、72h有统计学意义，说明较大的治疗时间组对肿瘤的抑制效果略强于较小的治疗时间组。治疗时间相同，而治疗功率不同的组间比较：组4与组6相比VI在治疗后72h有统计学差异，组2与组5相比VI值在治疗后72h有统计学差异，说明较大的治疗功率对肿瘤的抑制效果略强。
　　（4）病理检查：HE染色：组1各时间点肿瘤组织结构完整，内皮细胞排列比较紧密。各治疗组在超声治疗后24h、72h细胞破碎，排列疏松，可见少量细胞空泡形成。CD31染色：对照组血管腔完整，充盈良好，微血管密度较大；超声治疗后微血管明显减少，血管腔闭合，有血管受损的表现，且随着功率和时间的增加，血管密度明显减少，细胞破碎增多，可见更多的凋亡细胞。
　　（5）MVD计数：组2、3治疗后24小时MVD值明显减少，与组1有统计学意义，治疗后72h与对照组无统计学意义，组4在治疗后24h、72h与组1相比有统计学意义。
　　实验结论：
　　（1）超声治疗方法中1W/cm2+1min和1W/cm2+3min间歇辐照方法能够对肿瘤的阻断作用持续达24h，1/Wcm2+3min、2W/cm2+1min、2W/cm2+3min持续辐照方法能够阻断肿瘤的血供达72h以上。
　　（2）超声联合自制纳米泡治疗小鼠皮下H22肿瘤较理想的参数为：超声声强1W/cm2，辐照时间为1min或3min间歇辐照模式。
　　第二部分超声介导自制纳米泡联合顺铂治疗小鼠皮下H22肿瘤疗效的初步探讨
　　实验目的：初步探讨超声辐照自制纳米泡联合化疗药物对小鼠皮下H22肝肿瘤的治疗效果，并探讨其可能的机制。
　　实验方法：建立20只小鼠H22肝癌移植瘤模型，随机分为5组:即空白对照组，单纯超声组（US），超声微泡组（US+NB），药物组（顺铂，CDDP），超声微泡+药物组（US+NB+CDDP）,每组4只。对照组不予治疗，仅尾静脉注射生理盐水0.1ml，单纯超声组只是辐照肿瘤区域（输出功率1W/cm2，辐照时间1min），超声微泡组于尾静脉注射自制纳米泡0.1ml，同时予以超声辐照，药物组只给于腹腔注射CDDP0.2ml（按1mg/kg稀释），超声微泡+药物组于腹腔注射CDDP0.2ml后即刻，用超声探头辐照肿瘤组织，以上超声辐照的条件均保持一致（功率1W/cm2,时间1min，占空比20％）。所有鼠均隔一天治疗一次，共五次，第9天为最后一次治疗，至第11天处死小鼠。开始治疗后，观察肿瘤生长情况，并用超声仪器测量肿瘤最长径（a）与其最短径（b），计算肿瘤体积（V=1/2ab2），绘制生长曲线，至第11天时每组处死两只小鼠并计算肿瘤质量，计算质量抑瘤率。取肿瘤组织观察肿瘤坏死情况，做HE染色和免疫组化法测量微血管密度（MVD）、细胞增殖指数（KI-67），进行定量分析。
　　实验结果：
　　（1）对照组和单纯超声组之间的体积抑瘤率和质量抑瘤率无统计学意义，余各治疗组与对照组之间的体积抑瘤率和质量抑瘤率有统计学意义；超声微泡组和单纯药物组与超声微泡药物组比较，体积抑瘤率和质量抑瘤率有统计学意义。
　　（2）除单纯超声组，余各治疗组的血管密度（MVD）和肿瘤增殖指数（KI-67LI）与对照组相比有统计学意义。单纯药物组的肿瘤体积虽有所减小，但血管密度与对照组相比并无统计学意义,而增殖指数与对照组相比有统计学意义。
　　实验结论：超声辐照自制纳米泡能够抑制小鼠皮下H22肿瘤的生长，与顺铂联合应用时能够产生协同作用，能够更加明显的抑制肿瘤的生长，其机制可能与破坏肿瘤新生血管，阻断肿瘤血供和抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞坏死有关。

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引言

第一部分 超声联合自制纳米泡对小鼠H22肿瘤抑制作用超声参数的探讨

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分：超声介导自制纳米泡联合顺铂对小鼠H22肿瘤抑制疗效的初步探讨

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

全文总结及实验不足之处

综述:超声介导微泡携带药物或基因靶向治疗肿瘤的研究进展

附录 英文缩略词

致谢