长脉冲胃电刺激对糖尿病大鼠胃动力的影响及其机制研究

摘要

第一部分糖尿病大鼠胃动力及胃窦ICC的改变
　　目的：以糖尿病大鼠为研究对象，观察糖尿病状态下胃动力和胃窦ICC的改变。
　　方法：雄性Sprague Dawley（SD）大鼠20只，随机分为两组，糖尿病组（DM group，n=10）采用60mg/kg链脲佐菌素（STZ）一次性腹腔注射成功建立糖尿病模型；其余10只为正常对照组（normal control group，n=10）。分别于造模前、成模后、成模后第2周、4周和6周记录两组大鼠的血糖和体重。成模后第6周末，应用酚红餐灌胃法检测胃排空及器官浴槽技术检测胃窦环形肌收缩能力来判断两组大鼠胃动力的改变情况；应用免疫组化、RT-PCR和Western blot等实验技术评估胃窦c-kit的表达情况；应用透射电镜仔细观察ICC超微结构损伤情况。
　　结果：（1）造模前两组大鼠血糖水平没有明显地差异；成模后及成模后第2周、4周和6周，糖尿病组大鼠血糖水平与正常组相比显著升高；（2）造模前两组大鼠体重亦没有明显差异；成模后及成模后第2周、4周和6周，糖尿病组大鼠体重较同期正常组相比都有明显下降；（3）糖尿病组大鼠胃排空率较正常组相比发生明显延迟（0.57±0.06％vs0.73±0.02%，P=0.018）；（4）在选择性破坏ICC前后，糖尿病组肌条收缩能力均较正常组的明显减弱；（5）RT-PCR显示糖尿病组大鼠胃窦c-kit mRNA的表达量相对于正常组明显降低（0.024±0.001 vs1.000±0.095，P=0.000）；（6）免疫印迹法实验显示胃窦c-kit蛋白表达量在糖尿病组较正常组相比显著降低；（7）正常组胃窦 c-k it阳性细胞主要分布在肌间层，肌内层以及黏膜下层，而糖尿病组各层次c-kit阳性细胞表达均明显减少；（8）糖尿病组ICC超微结构较正常组显示细胞器显著减少，线粒体及内质网明显肿胀。
　　结论：糖尿病大鼠出现明显胃排空延迟，胃窦收缩力减弱，并且伴随有ICC的缺失和损伤。
　　第二部分糖尿病大鼠胃窦SCF/c-kit通路及SMC的改变
　　目的：以糖尿病胃轻瘫大鼠为动物模型，研究在糖尿病状态下 SCF/c-kit信号通路及SMC的改变。
　　方法：应用免疫印迹法检测胃窦SCF、a-SMA、mysion11蛋白表达；应用RT-PCR检测SCF、a-SMA mRNA表达；应用免疫荧光双标a-SMA与c-kit同时定位平滑肌细胞与ICC细胞的表达；应用透射电子显微镜观察SMC超微结构的改变。
　　结果：（1）Western blot结果显示，糖尿病组大鼠胃窦的SCF蛋白表达量较正常组相比显著降低，但糖尿病组胃窦的a-SMA表达较正常组未见明显改变，而mysion11则较正常组表达出现显著降低；（2）RT-PCR结果显示，糖尿病组大鼠胃窦SCF mRNA的表达量相对于正常组明显降低，而a-SMA mRNA的表达量则较正常组未见明显改变；（3）免疫荧光双标结果显示在正常组c-kit+细胞夹杂在a-SMA+细胞之间，肌间层与肌内层有较多 ICC分布，而糖尿病组 a-SMA+细胞未出现较明显改变，c-kit+细胞则明显减少；（4）正常对照组SMC整体呈梭形，其细胞核则为长椭圆形，胞核内的异染色质分布相对较为均匀，细胞质内明显可见丰富的密斑、密体，肌丝亦清晰可见，可见线粒体较多分布其中。糖尿病组的SMC排列较为紊乱，细胞核较为不规则，染色质呈致密块状，染色较深，胞内可见有许多较大的胞质溶解性空泡，密斑及密体、肌丝同时都明显减少，线粒体异常肿胀、呈空泡样变、甚至溶解。
　　结论：糖尿病时SCF/c-kit信号通路表达下调，SMC数量未见明显减少，但结构出现显著损伤。

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第一部分 糖尿病大鼠胃动力及胃窦ICC的改变

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第二部分 糖尿病大鼠胃窦SCF/c-kit通路及SMC的改变

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第三部分 长脉冲胃电刺激对糖尿病大鼠胃动力的影响及机制研究

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研究内容小结

综述: 功能性胃肠病的最新研究新进展

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