长脉冲胃电刺激对糖尿病大鼠胃动力及Cajal间质细胞的影响及其机制研究

摘要

第一部分糖尿病大鼠胃排空和Cajal间质细胞的改变
　　目的：以糖尿病大鼠为模型，研究糖尿病状态下胃排空和胃窦Cajal间质细胞的改变。
　　方法：取雄性Sprague Dawley大鼠12只，通过随机化分组分为两组：糖尿病组（DM group, n=6），通过腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ,60mg/kg）建立糖尿病模型；正常对照组（normal control group, n=6）。在造模前、成模后以及第2、4、6周记录每只大鼠的体重和血糖。在第6周末应用酚红餐法检测大鼠胃排空改变；使用透射电镜技术观察Cajal间质细胞超微结构改变；应用Western blot、免疫荧光法用来评估胃窦c-kit的表达情况。
　　结果：（1）造模前糖尿病组与正常对照组大鼠体重无显著差异。成模后第2、4、6周，糖尿病组大鼠体重与正常对照组相比均明显下降；（2）造模前两组大鼠之间血糖水平无显著差异。成模后以及第2、4、6周，糖尿病组血糖水平与正常组相比均明显升高；（3）糖尿病组大鼠相对于正常组胃排空明显延迟((55.89±3.32)％ vs(76.55±2.36)%,(P=0.0005)；（4）Western blot结果：糖尿病组胃窦组织c-kit蛋白表达水平与正常组相比显著降低；（5）免疫荧光检测糖尿病组胃窦c-kit+细胞数目与正常组相比明显减少；（6）糖尿病组大鼠Cajal间质细胞超微结构示细胞器数量减少，线粒体与内质网肿胀明显。
　　结论：糖尿病大鼠与正常大鼠相比胃排空明显延迟，Cajal间质细胞结构受损、数量减少。
　　第二部分 IGF-1通路及其他ICC相关调节因素对糖尿病大鼠ICC改变的影响
　　目的：通过糖尿病胃轻瘫大鼠为模型，研究IGF-1通路及其他ICC相关调节因素对糖尿病胃轻瘫大鼠ICC改变的影响。
　　方法：通过免疫印迹法测定胃窦组织中 c-kit、SCF、IGF-1R以及其它相关调节因素5-HT2B、nNOS蛋白的表达；采用免疫荧光技术检测c-kit+细胞和IGF-1R的表达；应用酶联免疫吸附试验测定血清中IGF-1水平;通过透射电子显微镜技术观测ICC超微结构的改变。
　　结果：（1）免疫印迹法结果显示，糖尿病组胃窦组织 c-kit/SCF、IGF-1R蛋白以及5-HT2B、nNOS蛋白表达水平与正常对照组相比均明显下降；（2）免疫荧光结果显示糖尿病组大鼠胃窦 c-kit+细胞数目减少，IGF-1R受体表达减少；（3）酶联免疫吸附试验显示糖尿病组大鼠血清中IGF-1水平较正常对照组显著降低。
　　结论：糖尿病胃轻瘫大鼠 SCF/c-kit以及 IGF-1信号通路表达下调，5-HT2B及 nNOS表达降低，并可能参与ICC缺失与损伤。
　　第三部分长脉冲胃电刺激对糖尿病大鼠胃动力和Cajal间质细胞的影响及其机制研究
　　目的：通过糖尿病胃轻瘫大鼠为模型，研究IGF-1在胃电刺激GES修复糖尿病大鼠胃窦ICC中的作用。
　　方法：通过透射电镜检测ICC超微结构的改变；应用免疫印迹法测定胃窦组织中c-kit、SCF、IGF-1受体蛋白的表达；应用免疫荧光法检测ICC细胞和IGF-1受体的表达；应用酶联免疫吸附试验测定血清中IGF-1水平变化。
　　结果：（1）成模前各组大鼠的血糖值无明显差异；成模后和第2周、4周和6周，真性及假性刺激组均与糖尿病组无明显差异；（2）成模前各组大鼠间体重无显著差异；成模后和第2周、4周，真性刺激组体重与糖尿病组相比无明显增加；但在成模后第6周，真性刺激各组大鼠体重与糖尿病组相比有显著差异；（3）糖尿病组胃排空较正常组明显延迟，予以3种参数胃电刺激后胃排空均有显著改善，其中GES2刺激效果最为显著；（4）免疫印迹法结果显示予以真性胃电刺激后，c-kit、SCF、IGF-1R蛋白表达水平较糖尿病组均有明显增加；（5）免疫荧光结果显示予以真性胃电刺激后c-kit+细胞数目增多，IGF-1R受体增多；（6）酶联免疫吸附试验显示真性胃电刺激后各组大鼠血清中IGF-1水平较糖尿病组显著升高；（7）真性胃电刺激组ICC细胞超微结构与糖尿病组相比，细胞膜结构更为完整，核内异染色质减少，线粒体、内质网肿胀程度显著降低，平滑肌细胞排列整齐，大的溶解空泡较少见，未见明显肿胀。
　　结论：长脉冲胃电刺激可使糖尿病大鼠体重增加，并改善糖尿病大鼠胃排空延迟；长脉冲胃电刺激能上调IGF-1信号通路的表达，显著增加糖尿病大鼠胃窦Cajal间质细胞的表达并减轻糖尿病对其病理损伤。

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第一部分 糖尿病大鼠胃排空和Cajal间质细胞的改变

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材料和方法

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第二部分 IGF-1通路及其他ICC相关调节因素对糖尿病大鼠ICC改变的影响

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参考文献

第三部分 长脉冲胃电刺激对糖尿病大鼠胃动力和Cajal间质细胞的影响及其机制研究

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四、结果

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参考文献

研究内容小结

主要内容小结

综述: 胃电刺激治疗胃轻瘫研究进展

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