细胞自噬在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中的作用及其机制

摘要

目的：通过观察小鼠生存状况、检测相关炎症细胞因子的分泌以及相关组织病理学改变，探讨细胞自噬在LPS介导的内毒素休克模型中的作用及其机制，为相关疾病的治疗提供新的潜在的治疗靶点。
　　方法：
　　1、使用不同剂量的LPS分别对各组C57BL/6小鼠进行腹腔注射，通过绘制小鼠生存曲线以及对肺和小肠进行组织病理学检测，探讨小鼠内毒素休克模型中LPS的半数致死剂量。ELISA方法检测小鼠在LPS半数致死剂量下不同时间点血清中TNF-α、IL-6及IL-10浓度，并绘制其随时间的变化曲线。
　　2、将公认的自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3-MA分别用于LPS介导的内毒素休克模型，观察各组小鼠生存曲线，检测肺脏及小肠的组织病理学变化，并通过ELISA方法检测血清中各炎症因子浓度，分析雷帕霉素和3-MA在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中的作用。
　　3、取小鼠骨髓细胞并刺激使其分化为巨噬细胞，在应用LPS刺激细胞的同时，分别应用雷帕霉素或3-MA。ELISA方法检测细胞上清中各炎症因子浓度。
　　4、将雷帕霉素或3-MA分别用于LPS介导的内毒素休克模型，免疫组织化学染色法检测各组小鼠肺脏以及小肠的LC3B蛋白表达，Western Blot法检测各组小鼠肺脏的LC3B蛋白表达。
　　5、取敲除TLR4基因的小鼠的骨髓来源巨噬细胞，在应用LPS刺激细胞的同时，分别另外应用雷帕霉素或3-MA。ELISA检测细胞上清中炎症因子TNF-α浓度。
　　结果：
　　1、各组小鼠的生存曲线显示该模型中LPS的半数致死剂量约为27mg/kg。血清中各炎症因子随时间的变化曲线显示，给予LPS刺激后，血清中TNF-α和IL-10在1.5h后浓度最高，IL-6在3h后浓度最高。
　　2、通过观察各组小鼠生存曲线、组织HE染色切片以及血清中各炎症因子浓度得知：在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中，促进细胞自噬后，小鼠生存率有所下降，组织损伤程度加重，血清中 TNF-α和 IL-6表达增加，IL-10表达降低；抑制细胞自噬后，小鼠生存率有所上升，组织损伤程度减轻，血清中TNF-α和IL-6表达降低，IL-10表达增加。
　　3、在体外实验中，在LPS刺激的细胞上清中，诱导细胞自噬可使TNF-α和IL-6表达升高，IL-10表达降低；抑制细胞自噬可使TNF-α和IL-6表达降低， IL-10表达升高。
　　4、在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中，诱导细胞自噬后发现小鼠肺组织和肠组织中LC3B蛋白表达水平升高，抑制细胞自噬后发现小鼠肺组织和肠组织LC3B蛋白表达水平降低。
　　5、在敲除TLR4基因的小鼠的骨髓来源巨噬细胞中，在LPS刺激下，应用雷帕霉素和3-MA后细胞上清中炎症因子TNF-α的浓度未发生明显变化。
　　结论：
　　1、在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中，LPS半数致死剂量约为27mg/kg。对小鼠给予LPS刺激后，血清中TNF-α和IL-10的浓度在1.5h后达到最高峰， IL-6的浓度在3h后达到最高峰。
　　2、促进细胞自噬可加重LPS引起的小鼠内毒素休克反应，抑制细胞自噬则可减轻LPS引起的小鼠内毒素休克反应。
　　3、确认了雷帕霉素和3-MA在本模型中起到了促进或抑制细胞自噬的作用，并初步推测其机制与TLR4信号通路相关。

目录

声明

主要中英文缩略词表

前言

第一部分 小鼠LPS内毒素休克模型的构建

材料和方法

一、实验仪器

二、实验动物

三、实验试剂

四、实验方法

实验结果

一、LPS介导的小鼠内毒素休克模型中LPS半数致死量的确定

二、小鼠LPS内毒素休克模型中血清各相关炎症因子浓度随时间的变化

小结

第二部分 细胞自噬在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中的作用及其机制

材料和方法

一、实验仪器

二、实验动物

三、实验试剂

四、实验方法

实验结果

一、细胞自噬在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中对小鼠生存状况的影响

二、细胞自噬在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中对小鼠炎症因子分泌的影响

三、细胞自噬对LPS刺激的体外培养的骨髓来源的巨噬细胞的炎症因子分泌状况的影响

四、雷帕霉素和3-MA在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中对小鼠体细胞自噬水平的影响

五、细胞自噬在LPS介导的小鼠内毒素休克模型中作用机制的初步探究

小结

讨论

结论

参考文献

综述:细胞自噬分子机制及自噬相关疾病的研究进展

致谢