基于猪角膜脱细胞基质为载体的可移植口腔黏膜上皮细胞片在眼表重建中的应用

摘要

目的：采用无异源性滋养细胞、无血清的培养系统，在猪角膜脱细胞基质及人去上皮羊膜上体外扩增口腔黏膜上皮细胞，并检测和比较它们的细胞形态及表型特性。然后在动物角膜缘干细胞缺陷模型上行以猪角膜脱细胞基质为载体的口腔黏膜上皮细胞片移植，并检验其在抗血管新生及眼表重建中的作用及机制。
　　方法：SD大鼠的口腔黏膜上皮细胞片分别培养在猪角膜脱细胞基质及羊膜上，应用RT-PC R及免疫荧光染色技术来分析细胞片的上皮生长特性及干细胞特性。
　　日本大耳兔完成标准的角膜缘干细胞失代偿造模后，行以猪角膜脱细胞基质为载体的口腔黏膜上皮细胞片移植，3个月后进行角膜新生血管评分、角膜混浊程度评分，利用免疫荧光染色技术检测干细胞标志物表达情况，并利用RT-PCR技术检测抗血管生长的TIM P-3以及促血管生长的MMP-3的表达。
　　结果：培养3到4周后即可获得多层的、贴附紧密的、可移植的口腔黏膜上皮细胞片，RT-PCR和免疫荧光染色均显示这种细胞片既可表达上皮细胞特异性标志物CK3，亦可表达上皮干细胞标志物P63和ABCG2。动物实验显示这种角膜植片可稳定眼表，角膜移植术后角膜新生血管评分、角膜混浊程度明显降低，重建前后差异具有显著统计学意义（P<0.05）；免疫荧光染色显示重建术后的眼表角膜上皮再生，干细胞标志物p63和A BCG2呈阳性表达；RT-PCR显示抑制血管生长的TIMP-3术后升高、促进血管生长的MMP-3明显降低，重建前后差异具有显著统计学意义（P<0.05）；
　　结论：口腔黏膜上皮细胞可以采用无异源性滋养细胞及血清的培养系统成功培养于猪角膜脱细胞基质之上，并能保持上皮细胞的形态学及表型特征（包括分化特性和干细胞特性）。这种可移植的细胞片可以作为整体来进行角膜移植，不仅能解决角膜缘干细胞失代偿而且还能解决深层角膜病变，对重建眼表及恢复有用视力均有明显的疗效。

目录

声明

前言

绪言

材料和方法

结果：

一． 材料与方法

结果：

讨论

结论

参考文献

综述:体外培养口腔黏膜上皮细胞用以治疗角膜缘干细胞缺乏

博士期间以第一作者发表文章

致谢