生物样品中N-聚糖的质谱分析

摘要

伴随着各种生物活性物质和免疫分子的发现及研究，糖在生物体内不单单具有提供能量和组成生物结构的功能，作为蛋白质翻译后修饰的一种重要手段，在细胞的信号传导，癌症疾病等一切与生物体相关的生命活动中糖基化均发挥着重要作用，模式生物糖基化现在是一个比较热门的研究方向，这将会推动整个人类的糖组学的研究进展。
　　斑马鱼作为模式生物，非常适合作为脊椎动物的代表进行研究，我们利用斑马鱼不同时期的胚胎研究斑马鱼的聚糖结构以及它在胚胎发育中聚糖种类的变化，这对我们分析糖基化有重要的作用。在本文，我们利用斑马鱼的胚胎进行糖组学的研究，根据前辈们的经验，我们发现斑马鱼胚胎中游离糖(葡萄糖低聚物)严重影响了我们对斑马鱼聚糖的检测，本文主要利用游离糖和糖聚合物两者化学结构上的差别从两个方面来降低污染物：一方面，我们利用硼氢化钠把游离糖的还原端醛基还原成羟基，然后酶切进行糖的衍生，利用 HP LC进行分离，降低污染物对实验的影响，在另一方面，我们利用MALDI-MS检测聚糖，我们利用酶切下来聚糖的还原端是葡基胺，在葡基胺还没有水解成醛基的时候，衍生试剂 TMPP与氨基反应，利用游离糖和快速酶切下来聚糖的还原端的不同去除游离糖。在MALDI-MS检测中，在斑马鱼中唾液酸聚糖有一些不正常的结构 Galβ1?4[Neu5Ac-(α2,3)]Galβ1?4[Fuc(α1,3)] GlcNAc，我们发现在斑马鱼中含有一种新的结构，羟乙酰化的 N-羟乙酰神经氨酸（Neu5Gc），这种结构增加了唾液酸聚糖的疏水性，Neu5Gc具有高度的物种特异性和组织特异性，在猪和牛体内富含Neu5 Gc结构，同时我们对比了1胚期，16胚期，32胚期，64胚期和128胚期之间聚糖的差别，希望找出不同时期斑马鱼胚胎中聚糖的差别。
　　同时，我们同时还鉴定了不同肿瘤细胞之间的聚糖，癌症细胞上的聚糖种类与正常细胞上的聚糖种类有差别，例如癌症细胞的高甘露糖要比正常细胞比例要高。不正常的糖基化有可能导致癌症的发生，所以检测癌症细胞的聚糖对生物体和临床都有重大的意义。

目录

声明

1 绪 论

1.1 糖生物学概念

1.2 聚糖的分类

1.3 N-聚糖的分析方法

1.4 N-聚糖的衍生方法

1.5 本文的主要研究内容

2 斑马鱼的糖组学分析

2.1 引言

2.2 实验部分

2.3 结果与讨论

2.4 小结

3 MALDI-MS鉴定不同细胞的聚糖

3.1 引言

3.2 实验部分

3.3 结果与讨论

3.4 小结

4 结论与展望

4.1 本文研究内容与结论

4.2 展望

致谢

参考文献