肿瘤靶向多肽与喹喔啉偶联衍生物的合成及其活性评价的研究

摘要

传统的化学药物治疗在癌症治疗中起着非常重要的作用，但是其产生的药剂依赖性和毒副作用却极大地限制它的临床应用。近年来，分子靶向药物因其低毒性和高药疗性已成研究热点。喹喔啉基团（QX）是一种DNA嵌入剂，能有效地嵌入DNA碱基序列中从而阻止DNA的转录、复制和修复。肿瘤靶向多肽RGD、TAT、pHLIP（pH Low Insertion Peptide）等可以通过化学修饰方法使活性药物分子选择性地进入肿瘤细胞。其中，RGD是整合素蛋白结合配体的核心多肽序列，可特异性结合肿瘤新生血管和癌症细胞表面高表达的整合素受体αvβ3，因此含RGD的药物和多肽是整合素结合其配体的有效抑制剂。本文通过对QX衍生物与细胞靶向肽进行共价偶联，期望得到一种具有肿瘤高靶向性的化学药物，结合光动力学治疗，以期望达到选择性杀伤肿瘤细胞的效果。
　　本文主要研究内容有：
　　（1）喹喔啉基团与靶向肽合成方法的研究：通过点击化学反应生成QX-COOH，探索QX-COOH与S3的偶联条件。进一步用马来酰亚胺修饰QX-COOH生成NQX，并将其分别与CS2、iRGD、TAT多肽反应，发现NQX与多肽可能发生了反应，但是因为疏水性极强的QX与亲水性极强的多肽可能发生自主装形成大粒径颗粒滞留在HPLC柱上导致无法洗脱。因此在后续研究中引入亲水性的PEG链来降低QX基团的疏水性。选择SM(PEG)24作为linker，其琥珀酰亚胺酯端与喹喔啉衍生物的氨基端反应生成PEG-QX，将PEG-QX分别与CS2、iRGD、TAT和cRGD反应，其马来酰亚胺端与含巯基的多肽反应生成碳硫键，最终得到化合物cRGD-QX，并通过1H NMR和ESI-MS表征。
　　（2）所得的偶联药物在光动力学下的药效研究：基于喹喔啉特有的荧光吸收发射特性和不同癌症细胞上整合素受体表达量的不同，选择了三种不同代表性的癌细胞Bel-7402、MCF-7、MDA-MB-231来进行化合物的药效评价。结果表明：与非光照条件相比，UVA光照下两种化合物的抗肿瘤活性均明显提高，其中dT-QX-2Cl对三种细胞的IC50值均降低到1μM以下；对cRGD-QX的IC50下降到30μM左右，潜在原因可能是亲水性PEG链影响了疏水性脂膜对药物的摄取，证明在喹喔啉衍生物中，靶向肿瘤细胞胞内胸苷激酶要比靶向肿瘤表面标志物效果好。

目录

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主要缩略词表

1. 绪论

1.1 肝癌的研究现状

1.2 被动靶向与主动靶向

1.3 dT-QX的研究现状

1.4 本文的研究目的和研究内容

2. 靶向多肽与喹喔啉衍生物偶联合成的初步探究

2.1 引言

2.2 主要试剂

2.3 主要仪器

2.4 实验方法

2.5 结果与讨论

2.6 本章讨论

3. 靶向多肽与PEG-QX衍生物偶联合成的研究

3.1 引言

3.2 主要试剂

3.3 主要仪器

3.4 实验方法

3.5 实验结果与讨论

3.6 本章小结

4. 靶向多肽与PEG-QX偶联物的药效评价

4.1 引言

4.2 主要试剂

4.3 主要仪器

4.4 实验方法

4.5 实验结果

4.6 本章总结

5. 全文总结

5.1 研究成果

5.2 特色和创新

5.3 下一步设想

5.4 展望

致谢

参考文献

附录补充说明图