LC-M S/M S测定血浆盐酸美普他酚及其临床应用研究

摘要

疼痛给患者带来了巨大的痛苦，临床上短期内治疗疼痛最有效的方法是药物疗法，麻醉性强效镇痛药有吗啡、度冷丁等，但是这些药物的副作用较大，成瘾性强。新型镇痛药盐酸美普他酚的依赖性小且安全性高，为了探究剂量、食物和性别等因素对盐酸美普他酚片剂在体内吸收速率和程度的影响，降低新剂型胶囊的上市成本以及研究盐酸美普他酚在体内生成的代谢物，本文建立了LC-MS/MS分析法分别测定人血浆盐酸美普他酚及其代谢物的浓度，并将其应用于药物代谢动力学研究、药物等效性评价和药物代谢物分析，具体的研究内容如下：
　　以C18(5μm,2.1×50mm)为色谱柱，流动相分别为含0.05％甲酸和5mM乙酸铵的水溶液和乙腈，设置0.40mL/min的流速、20?L的进样量和梯度洗脱的方式，并以美普他酚-d3为内标，234.2→107.1（美普他酚）与237.3→107.1（内标）为定量检测离子对，建立测定血浆盐酸美普他酚浓度的LC-MS/MS分析方法。在1.26~224ng/mL的线性范围内进行方法学的确证，结果显示该方法的特异性良好，不受氨基酸等内源性物质的干扰；标准曲线的线性相关系数为0.9995；批内与批间精密度的RSD为2.50%~8.80%，准确度为90.99%~105.11%；经甲醇沉淀蛋白后的提取回收率为86.46%~91.26%，内标归一化后的基质效应RSD为2.13%~2.49%，稳定性的RSD为0.10%~7.00%，故该方法适用于血浆样品中盐酸美普他酚的浓度。然后以实测药物浓度为基本依据，并利用相关统计学软件，分析剂量与片剂主要药代参数的相关性，性别和食物的影响，以及体内蓄积的倾向。同时，也可以判断等剂量的盐酸美普他酚片剂与胶囊在体内的等效性结果。
　　MS模式下，用气动辅助电喷雾离子化(ESI)和选择性离子检测(MRM)的方式，在500℃的离子源温度、60V的解簇电压(DP)、40Psi的气帘气(CUR)、40Psi的雾化气和50Ps i的辅助气等最佳的质谱条件下，对血浆中盐酸美普他酚的代谢物进行鉴别。根据实际样品质谱图中碎片离子([M+H]+)的质荷比判断盐酸美普他酚体内代谢物，当质荷比为248.2、250.3和220.2时，经结构解析为3–乙基–3–(3–羟苯基)–1–甲基六氢–2H–氮杂卓–7–酮、3–(2–羟乙基)–3–(3–羟苯基)–1–甲基六氢–2H–氮杂卓和3–乙基–六氢–3–(3–羟基苯基)–2H–氮杂卓三个盐酸美普他酚I相代谢物，还检测到与葡萄糖醛酸和硫酸结合的II相代谢物。分别以10mM乙酸铵水溶液和乙腈为流动相，并用盐酸美普他酚-d3做内标，建立LC-MS/MS分析方法同时测定经500U/mL葡糖糖醛酸酶和200U/mL硫酸酯酶酶解，及甲醇沉淀蛋白处理后的血浆样品中代谢物的总浓度，从平均浓度-时间曲线可以看出各分析物在体内的变化趋势基本一致。

目录

声明

1 绪论

1.1 引言

1.2 镇痛类药物

1.3 血药浓度监测

1.4 药物临床试验

1.5 临床药代动力学研究

1.6 研究背景与思路

2 实验部分

2.1 实验仪器与试剂

2.2 临床试验设计与过程

2.3 盐酸美普他酚血药浓度的测定

2.4 盐酸美普他酚体内代谢物的分析

3 结果与讨论

3.1 LC-MS/MS测定血浆盐酸美普他酚

3.2 盐酸美普他酚片药代动力学研究结果

3.3 盐酸美普他酚片与胶囊等效性评价

3.4 盐酸美普他酚代谢物的分析与鉴定

3.5 血浆中盐酸美普他酚及其代谢物的检测

4 全文总结

致谢

参考文献

附录 攻读硕士学位期间完成的主要论文