let-7e通过抑制PARP1介导的DNA损伤修复增加卵巢癌对顺铂的敏感性

摘要

化疗耐药是导致卵巢癌预后差的重要原因。铂类药物进入细胞后与DNA交联导致DNA单链和双链损伤，从而触发凋亡，而DNA损伤修复功能增强是导致卵巢癌铂类耐药的机制之一。PARP1在DNA损伤修复中发挥关键作用，且是let-7e的预测靶点。我们的前期研究发现上调let-7e能够增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性，本文旨在研究let-7e是否通过抑制PARP1介导的DNA损伤修复增加卵巢癌的化疗敏感性。方法：原位杂交和免疫组化分别检测let-7e和DNA损伤修复关键蛋白PARP1、BRCA1、Rad51在卵巢癌组织中的表达。采用MTT和克隆形成实验检测卵巢癌细胞的顺铂敏感性。碱性和中性彗星实验、γH2AX免疫荧光检测DNA损伤修复。双荧光素酶报告实验检测let-7e是否靶向作用于PARP1的3’UTR端。采用Fisher确切概率法、生存分析、受试者工作曲线（ROC）、cox和logistics回归模型等统计方法探讨let-7e和PARP1、BRCA1、Rad51的临床意义。结果：原位杂交结果显示let-7e在化疗耐药组织中低表达，进一步证实了let-7e与化疗耐药相关。碱性和中性彗星实验、γH2AX免疫荧光显示上调let-7e后，DNA单链和双链损伤修复被抑制，而下调let-7e，DNA修复功能则增强；且let-7e能够负性调控双链修复关键蛋白BRCA1和Rad51的表达。双荧光素酶报告实验证实let-7e能够与PARP1的3’UTR端直接结合，并抑制其表达。对let-7e和PARP1进行同向上调和下调，发现let-7e能够作用于PARP1抑制DNA单链和双链损伤修复,体内外实验证实let-7e对PARP1的靶向调控最终能够增加卵巢癌对顺铂的敏感性。动物实验还发现与PARP1抑制剂类似，let-7e的模拟物agomir能够增敏顺铂的毒性作用。Fisher确切概率法、Kaplan-meier生存分析，单因素cox和logistics回归分析显示let-7e低表达，PARP1、BRCA1、Rad51高表达与卵巢癌患者化疗耐药及较差的预后相关；ROC曲线结果显示上述4个因子均能较好地预测卵巢癌患者的化疗反应性；多因素cox和logistics回归分析发现仅let-7e能够作为预测卵巢癌患者预后和化疗反应性的独立因子。结论：在卵巢癌中，低表达的let-7e能够通过解除对其靶点PARP1的抑制，增加DNA损伤修复功能，进而导致卵巢癌顺铂耐药；let-7e可发挥与PARP1抑制剂类似的作用，增加卵巢癌对顺铂的敏感性，提示let-7e有望成为逆转卵巢癌顺铂耐药的新靶点。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

参考文献

第一部分let-7e增加卵巢癌对顺铂的敏感性

引言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分 let-7e抑制卵巢癌细胞DNA损伤修复

引言

材料和方法

实验结果

讨论

参考文献

第三部分 let-7e作用于PARP1抑制DNA损伤修复

引言

材料与方法

实验结果

讨论

参考文献

第四部分 探讨let-7e及DNA损伤修复相关蛋白的临床意义

材料与方法

实验结果

讨论

参考文献

综述:miRNAs与卵巢癌铂类耐药的研究进展

附录 博士期间发表文章

致谢