SEMA4C介导肿瘤淋巴转移和作为乳腺癌生物标志物的研究

摘要

目的：淋巴管是肿瘤细胞转移的重要通道，而肿瘤细胞扩散转移是肿瘤患者死亡的主要原因，本文旨在研究肿瘤相关淋巴管内皮细胞高表达和分泌的SEMA4C在肿瘤淋巴转移中所起的作用，并评估血清SEMA4C能否早期诊断乳腺癌。 方法：通过淋巴管激光捕获显微切割分离肿瘤相关的淋巴管内皮细胞和正常的淋巴管内皮细胞，鉴定后进行cDNA表达谱芯片分析来确定淋巴管内皮细胞内的表达差异。mRNA和蛋白水平上的差异通过实时定量PCR和蛋白免疫印迹技术（WB）检测。蛋白质质谱技术、细胞内和细胞培养上清的WB检测以及细胞培养上清的ELISA检测确定了分泌形式的存在。并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测了小样本健康对照、乳腺癌和宫颈癌患者的血标本。用免疫荧光和免疫组化技术评估SEMA4C的定位和表达水平。并通过活体成像评估淋巴结的转移情况。SEMA4C在体外对淋巴管生成的作用通过淋巴管内皮细胞的迁移和成管实验来观察的。接下来我们进行了一项大样本的回顾性研究，在2014年9月到2016年6月间，于华中科技大学同济医学院附属同济医院甲乳外科和体检中心共收集948名乳腺癌、乳腺良性肿瘤患者和健康女性的血清标本，并收集参与者病历信息或者打电话咨询，同时进行血清SEMA4C值检测，最终通过受试者工作曲线（ROC）来计算诊断的准确性。 结果：肿瘤相关的淋巴管内皮细胞高表达SEMA4C并能产生分泌型的片段，并在细胞内和细胞培养上清中得到了证明。在乳腺癌和宫颈癌患者血清中检测到了高水平的SEMA4C。SEMA4C通过与肿瘤细胞和淋巴管内皮细胞相结合来发挥作用，体外和体内实验证明了SEMA4C通过不同的信号通路来介导淋巴管新生、淋巴结转移和促进肿瘤细胞迁移、增殖。我们检测了948名女性（449例乳腺癌术前标本，182例乳腺癌术后标本，206例乳腺良性肿瘤术前标本和111例健康对照标本）中的血清SEMA4C值，并进行临床病理分析。发现浸润性乳腺癌患者的血清中SEMA4C水平显著高于所有对照组。绘制ROC曲线后选取最佳诊断乳腺癌的SEMA4C截断点为5.00ng/mL。乳腺癌与健康对照相比较：AUC为0.807，（95％CI：0.76-0.86），敏感度62.58％，特异度81.08％；乳腺癌与良性乳腺疾病相比较：AUC为0.748（95％CI：0.71-0.79），敏感度为62.36％，特异度为71.36％；乳腺癌与非乳腺癌相比较：AUC为0.768（95％CI：0.73-0.80），敏感度和特异度分别为62.58％和74.76％。另外在治疗后监测患者血清SEMA4C时发现SEMA4C水平下降，但并没有恢复到健康对照的水平。 结论：SEMA4C能够以分泌因子的形式存在并促进淋巴管新生和肿瘤细胞淋巴转移，SEMA4C可能成为乳腺癌治疗过程中的一个行之有效的靶点，血清中高的SEMA4C可能是乳腺癌和宫颈癌的一个生物标志物。血清SEMA4C有可能成为早期发现和诊断乳腺癌的一种新型血清蛋白标志物。

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