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伏隔核亚区及细胞类型特异性全脑输入规律的定量研究

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1 绪 论

1.1 大脑神经环路研究的背景及意义

1.2 伏隔核(NAc)神经环路研究的背景及意义

1.2.1 NAc简介

1.2.2 NAc的亚区构成

1.2.3 NAc的细胞组成

1.3 传统神经示踪方法对于NAc神经环路的研究现状

1.3.1 传统的神经示踪方法简介

1.3.2 NAc神经环路的研究现状

1.4 NAc神经环路研究中的下一步目标和技术需求

1.5 利用嗜神经病毒标记神经环路方法简介

1.5.1 常用嗜神经病毒及其特性

1.5.2 特定类型神经元标记的实现

1.5.3 逆向跨一级标记特定类型神经元上游输入的实现

1.6 本文的主要内容

2材料和方法

2.1 实验动物

2.2 转基因小鼠的鉴定

2.2.1 主要的实验材料和设备

2.2.2 PCR的基本步骤

2.2.3 注意事项

2.3 脑立体定位注射手术

2.3.1 主要的实验材料和设备

2.3.2 立体定位注射主要实验步骤

2.3.3 注意事项

2.4 鼠脑组织琼脂糖包埋

2.4.1 主要的实验材料和设备

2.4.2 琼脂糖包埋主要实验步骤

2.4.3 注意事项

2.5 组织切片和免疫组织化学染色

2.5.1 主要的实验材料和设备

2.5.2 主要实验步骤

2.6 全脑数据的采集与分析方法

2.6.1 样本成像

2.6.2 数据统计与分析方法

3 NAc不同亚区细胞类型特异性全脑输入标记的实现

3.1 特异性标记NAc特定亚区特定类型神经元上游输入的实现

3.2 NAc特定类型神经元上游输入标记的可靠性分析

3.2.1 利用转基因小鼠分别标记D1R-MSNs和D2R-MSNs的可靠性分析

3.2.2 利用 RV及其辅助病毒进行特定类型神经元输入标记的可靠性分析

3.3 NAc全脑输入数据质量控制方法

3.3.1 NAc全脑输入标记结果

3.3.2 NAc全脑输入数据的质量控制

3.4 分析与讨论

(1)RV介导逆向跨单突触标记策略的技术优势

(2)局限性

3.5 本章小结

4不同亚区不同类型NAc神经元全脑输入分布规律与比较分析

4.1 不同类型NAc神经元全脑输入分布规律

4.1.1 D1R-MSNs和D2R-MSNs的输入在各个脑区分布情况

4.1.2 D1R-MSNs和D2R-MSNs的输入在皮层各层之间的分布情况

4.2 不同亚区NAc神经元全脑输入分布规律

4.2.1NAc core和NAc shell神经元的输入在各皮层区分布情况

4.2.2NAc core和NAc shell神经元输入在皮层下各核团分布情况

4.3 不同亚区不同类型NAc神经元全脑输入分布的相关性

4.4 分析与讨论

(1)D1R-MSNs和D2R-MSNs的输入在各个脑区的分布高度相似

(2)D1R-MSNs和D2R-MSNs的输入在皮层各层间的分布没有显著性差异

(3)中脑多巴胺能核团和五羟色胺能核团仅被稀释标记

(4)多个脑区或者核团对不同NAc亚区提供具有显著性差异的输入

4.5 本章小结

5投射到不同NAc亚区的基底外侧杏仁核神经元全脑输入模式

5.1 BL投射到NAc不同亚区神经环路的研究背景

5.2 投射到NAc不同亚区的BL神经元的标记与追踪

5.3 投射到NAc不同亚区的BL神经元全脑输入模式

5.3.1 rAAV2-retro简介及其逆行传播能力测试

5.3.2 BLcore神经元和BLshell神经元全脑输入的标记

5.3.3 BLcore和BLshell神经元全脑输入的分析

5.4 分析与讨论

(1)BLcore神经元和BLshell神经元属于解剖学上分离的不同神经元亚群

(2)BLcore神经元和BLshell神经元的输入分布总体相似

5.5 本章小结

6总结与展望

6.1 本文研究总结

6.2 研究展望

致谢

参考文献

附录1 攻读学位期间发表的学术论文目录

附录2 本文常用的英文缩写及全称

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