大鼠肾炎湿热证血尿模型的实验研究

摘要

目的： 通过建立不同造模方法的血尿模型，比较其相关指标，希望找到更符合中医湿热证，“病证结合”且价格低廉的肾炎血尿动物模型。 方法： 选择50只SPF级雄性Wistar大鼠为实验动物，在口服并定时尾静脉注射牛血清白蛋白(BSA)的基础上给予不同的干预，建立具有系膜增生性改变的湿热证大鼠血尿模型。随机分为5组：①正常组；②模一组，注射葡萄球菌肠毒素B(SEB)，不加环境和饮食因素的对照模型组；③模二组，注射SEB，施加环境和饮食湿热因素的改良模型组；④模三组，不注射SEB，施加环境和饮食湿热因素组；⑦模四组，不注射SEB，施加两次环境和饮食湿热因素组。观察动物至十二周末，处死动物。利用生物学方法、放射免疫法、光学显微镜等手段观察各组大鼠一般情况和体温、体重变化，尿红细胞，24小时尿蛋白定量，肾组织病理变化，同时检测各组大鼠的肾功能，血脂四项以及血清中IL-6的含量。 结果： 1.一般情况 各模型组大鼠均出现程度不等的发热、嗜卧、行动呆滞、耸毛、饮水少、食欲不振、肛门红肿充血、大便烂、尿少色深，舌质暗红，有的舌苔稍白腻，模二和模四组部分出现眼眵、腹泻、皮下水肿等表现，且皮下水肿、尿少色深等情况一直持续到实验结束。模三、四组体重较其他组显著增加，至实验结束。增加湿热因素的模型组体温净增值均较对照模型组(模一组)高，差异有统计学意义(P<0.05)。 2.尿红细胞及尿蛋白测定 2.1尿红细胞：第5周末至12周末，各模型组大鼠尿红细胞数明显增多，并持续至实验结束，与正常组比较有统计学意义(P<0.01)；12周末，模二组尿红细胞数最多，与其他模型组差异有统计学意义；模三、模四组红细胞数少于模一组，差异有统计学意义(P<0.01，P<0.05)；模四组尿红细胞数较模三组多，差异无统计学意义(P<0.05)。 2.2尿蛋白：12周末，各模型组尿蛋白较正常组明显增高，差异有统计学意义(P<0.01)；模二组尿蛋白最多，但较模一组差异无统计学意义(P>0.05)；模三组、模四组较模一组少，差异有统计学意义(P<0.01)；模四组尿蛋白量较模三组多，但差异无统计学意义(P<0.05)。 3.肾功能测定 3.1血尿素氮水平(BUN)：各模型组BUN水平较正常组均有所增高，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)；模一组BUN水平最高，但与模二、模三，模四组比较差异无统计学意义(P<0.05)；模四组BUN水平较模三组高，但差异无统计学意义(P>0.05)。 3.2血肌酐水平(Scr)：各模型组Scr水平较正常组明显增高，差异有统计学意义(P<0.01)；模二组Scr水平最高，与模一组比较差异有统计学意义(P<0.01)，模三、模四组Scr水平较模一组高，差异无统计学意义(P<0.05)；模四组Scr水平较模三组高，但差异无统计学意义(P<0.05)。 4.血脂水平测定 4.1血清总胆固醇(CHOL)：各模型组CHOL水平较正常组明显增高，差异有统计学意义(P<0.01)；模二组CHOL水平最高，与模一组比较差异有统计学意义(P<0.05)，模三CHOL水平较模一组低、模四组CHOL水平较模一组高，但差异无统计学意义(P<0.05)；模四组的CHOL水平较模三组高，但差异无统计学意义(P>0.05)。 4.2血清甘油三酯(TG)：各模型组TG水平较正常组明显增高，差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)；模二组TG水平最高，与模一组比较差异有统计学意义(P<0.05)，模三组TG水平较模一组低，差异无统计学意义(P>0.05)，模四组TG水平较模一组高，差异有统计学意义(P<0.05)；模四组TG水平较模三组高，差异有统计学意义(P<0.05)。 4.3血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)：各组实验大鼠血清HDL-C和LDL-C平之间均无统计学意义(P>0.05)。 5.血清白细胞介素6(IL-6)水平测定：各模型血清IL-6水平较正常组明显增高，差异有统计学意义(P<0.01)；模二组血清IL-6水平最高，与模一组比较差异有有统计学意义(P<0.05)；模三、模四组血清IL-6水平低于模一组，差异有统计学意义(P<0.01)；模四组血清IL-6水平高于模三组，但无统计学意义(P>0.05)。 6.病理组织学观察 光镜组织学变化：光镜下，正常组大鼠肾小球系膜细胞及基质无增生，毛细血管襻开放，肾小管结构规则，间质无增生及炎细胞浸润。各模型组大鼠可见弥漫性肾小球系膜区增宽，系膜细胞、系膜基质增生，毛细血管腔狭窄，部分肾小球萎缩，个别肾小球呈分叶状，肾小囊轻度扩张，肾小管间质有炎细胞浸润。尤其是模二组病理改变最为显著，模型一组与二组差异不明显；模三、模四组病理改变与模一、二组相似，但没有上述两组显著，模三与模四组比较无明显差异。 结论： 我们根据中医有关湿热证的病因病理学理论，利用综合因素，成功制成了具有湿热证改变的大鼠系膜增生性肾炎血尿模型。与传统造摸方法比较，施加饮食、环境湿热因素后，能升高大鼠的体温，加重大鼠血尿、水肿及血清总胆固醇、甘油三酯、IL-6、血肌酐水平，使其湿热表现更为突出。该模型无论从证的表现到病的特征，从发病条件到微观指标，都与人类肾炎湿热证型近似，是“病证结合”较好的肾炎湿热证血尿动物模型。而不注射SEB，仅增加饮食、环境湿热因素所制成的肾炎血尿模型，是病理改变典型且价格低廉的肾炎湿热证血尿动物模型。

目录

论文说明：中英文对照和缩略语

声明

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

结论

参考文献

文献综述一：系膜增生性肾小球肾炎动物模型综述

文献综述二：中医湿热证动物模型研究进展

致 谢

附 图