活血化痰方对非酒精性脂肪肝大鼠模型的实验研究

摘要

目的:
　　 通过复制非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型并予以活血化痰方干预,探讨非酒精性脂肪肝可能的发病机制,探讨活血化痰方对NAFLD大鼠模型的干预、治疗的可能机制,为临床应用活血化痰方防治NAFLD提供实验依据。
　　 方法:
　　 健康雄性SD大鼠60只,体重130-150g,级别为清洁级,适应性饲养一周后,按体重编号,完全随机分为正常组(A组,10只)和高脂造模组60只。高脂饲料饲组又分为模型组(B组,20只),二甲双胍干预组(C组,10只),活血化痰方低剂量干预组(D组,10只),活血化痰方高剂量干预组(E组,10只)。自饲养第8周起,模型组每周随机处死1只大鼠,取肝脏HE巳染色确定B组大鼠达到重度脂肪肝后结束实验。实验过程中观察大鼠的一般情况,HE巳染色对肝脏脂肪变性程度及炎症程度进行分级、评分,全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST、TG、TC含量,免疫蛋白印迹检测法检测模型组及空白组大鼠肝组织中CBS、CSE蛋白水平的表达,检测血清、肝组织NO、H2S水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清瘦素、脂联素、IL-6、IL-10、TNF-α水平。
　　 结果:
　　 1.本实验16周成功复制了大鼠重度非酒精性脂肪性肝(NAFLD)模型。16周末时模型组大鼠体重明显高于正常组,(P＜0.01),B组大鼠肝重量明显高于A组(P＜0.05),B组大鼠肝指数明显高于A组(P＜0.01),与正常组相比,模型组大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平明显升(P＜0.05或P＜0.01),与A组相比,B组大鼠肝脏脂肪变程度显著增加(P＜0.01),与A组相比,B组大鼠肝脏炎症程度显著增加(P＜0.01),与A组比较,B组大鼠肝脏肝组织NO的含量明显增加,H2S含量明显减少,两组有显著性差异(P＜0.01),大鼠肝组织中CBS、CSE蛋白表达水平结果,B组与A组比较,CBS,CSE蛋白表达水平明显减低,两组均有显著性差异(P＜0.05)。与A组相比,B组大鼠血清NO水平明显升高(P＜0.01),与A组相比,B组大鼠血清H2S水平明显降低(P＜0.05),与A组相比,B组大鼠血清IL-6水平明显升高(P＜0.01),与A组相比,B组大鼠血清TNF-α水平明显升高(P＜0.05),与A组相比,B组大鼠血清IL-6水平明显升高(P＜0.01),与A组相比,B组大鼠血清TNF-α水平明显升高(P＜0.05);与A组相比,B组大鼠血清瘦素含量明显升高(P＜0.01),脂联素含量明显降低(P＜0.05)。
　　 2.C、D、E组大鼠腹腔脂肪组织较模型组含量少,肝脏体积稍大,偏黄色或暗红色,部分大鼠肝脏切面有油腻感。B组大鼠肝组织可见重度弥漫性肝细胞大泡性脂肪变,C、D、E组大鼠轻、中度肝细胞大泡性脂肪变,较模型组减轻,A组大鼠肝脏无明显炎性改变,B组肝脏炎性改变较明显,大量肝细胞肿胀伴有气球样变,部分小叶内有少量坏死灶,汇管区可见大量炎性细胞浸润并且向小叶内延伸,小部分有炎性细胞聚集,C、D、E组大鼠少量肝细胞肿胀伴气球样变,无明显小叶内有坏死灶,汇管区少许炎性细胞浸润,偶有有炎性细胞聚集,较B组明显减轻。
　　 3与A组大鼠相比,B组肝组织中CBS、CSE蛋白表达水平显著降低(P＜0.05);与B组相比,C、D、E组蛋白表达水平增高(P＜0.05,或P＜0.01),与C组相比,D、E组均无差异,D、E组之间无差异。与A组大鼠相比,B组肝组织中NO显著增高(P＜0.01),与B组相比,C、D、E干预组肝组织中NO降低(P＜0.05,或P＜0.01),与C组相比,D、E干预组之间均无差异;与A组相比,B组肝组织中H2S降低(P＜0.01),与B组相比,C、D、E组肝组织中H2S升高(P＜0.05,或P＜0.01),与C、D、E组均无差异,D、E组之间无差异;
　　 4.与A组大鼠相比,B组血清中ALT、AST、TG、TC显著增高(P＜0.01);与B相比,C、D、E组血清中ALT、AST、TG、TC显著降低(P＜0.05,或P＜0.01);与C组相比,D、E组均无差异,D、E组之间无差异。
　　 5.与A组大鼠相比,B血清中瘦素水平显著升高(P＜0.01);与B组相比,C组、D组、E组血清中瘦素显著降低(P＜0.05,或P＜0.01);与C组相比,E组无差异;与D组有显著差异;与A组大鼠相比,B组血清中脂联素水平显著降低(P＜0.01);与B组相比,C组、D组、E组血清中脂联素水平显著升高(P＜0.05,或P＜0.01);与C组相比,D组、E组无差异;D组、E组之间无差异
　　 6.血清中IL-6、IL-10、TNF-α的含量变化;血清IL-6水平与A组大鼠相比,B组显著升高,C组、D组、E组较模型组降低,但三者之间无明显差异;与A组比较,B组血清IL-10水平显著降低(P＜0.01);与B组相比,C组、D组、E组血清中IL-10水平显著提高(P＜0.05,或P＜0.01),C组、E组较活D组提高显著;血清TNF-α水平与A组比较,B及D组显著增高(P＜0.01),C组、E剂量组较B组有显著降低;
　　 结论:
　　 1.高脂饲料喂养8周成功复制了大鼠单纯性脂肪肝(NAFL),16周功复制了大鼠重度非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型;
　　 2.活血化痰方有减少非酒精性脂肪性肝病大鼠血清TG、TC含量,有降低ALT、AST作用,可有效干预非酒精性脂肪性肝病大鼠模型的形成;减少血清中IL-6、TNF-α的生成,促进血清中IL-10的生成,可明显减轻非酒精性脂肪性肝病中的炎症反应;
　　 3.脂联素、瘦素在脂肪肝的发病过程中起了重要作用,活血化痰方提高大鼠血清中脂联素、降低瘦素含量,防治非酒精性脂肪肝;
　　 4.高脂饲养脂肪肝的发病机制可能与H2S的生成有关,活血化痰方可明显提高CBS、CSE蛋白表达水平,调高血清中H2S浓度,延缓脂肪肝的进程。