大黄䗪虫丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫机制影响的实验研究

摘要

目的：探讨经方大黄(庶虫)虫丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠被动吸烟条件下免疫状态（CD4+CD25+Foxp3+水平和Foxp3基因表达情况）的干预作用，为提高和预防肺癌患者生存质量提供理论和实验依据。
　　方法：
　　1.制备 Lewis肺癌荷瘤小鼠：选取清洁级昆明小鼠，将培养好的小鼠Lewis肺癌细胞（LLC），用生理盐水稀释，调整细胞浓度为1×107/ml，于小鼠右腋部皮下注射0.2ml/只进行造模。10天后，将腋下成瘤0.5cm×0.6cm以上的小鼠64只，随机分成模型对照组（模型组）、被动吸烟组（烟熏组）、大黄(庶虫)虫丸组（中药组）、顺铂组（西药组），未造模的小鼠为空白对照组（空白组），每组16只，共5组。
　　2.给药：被动吸烟组、大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组小鼠均给予被动吸烟，即在动式染毒柜中，采取动式吸入香烟烟雾，主流烟雾和侧流烟雾分别控制在11％和89%。每天染毒6h。同时，大黄(庶虫)虫丸组给予大黄(庶虫)虫丸按1.37g/kg/d给药，灌胃量0.4ml，每天l次，连续28d。顺铂组给予顺铂按lmg/kg腹腔注射(iP)，第4、11、18、25天各1次；空白组、模型组灌胃按等容积给蒸馏水，灌胃量0.4ml，每天l次，连续28d。
　　3.检测指标：分别于7、14、21、28天，观察小鼠的精神、活动、毛色、饮食情况；分别于14、28天，测各组小鼠体重、脾指数、胸腺指数；检测血清IL-2含量、脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例及转录因子 Foxp3基因表达情况；各组小鼠肺组织、腋部皮下瘤块石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察组织的病理形态学改变。
　　结果：
　　1.一般情况：与空白组比较，造模后小鼠的精神、活动、毛色、进食量和饮水量、体重增长均受到影响，其中被动吸烟组影响最明显，体重增长减慢较显；与被动吸烟组比较，大黄(庶虫)虫丸组精神有所改善，活动和饮食量有所增加，体重增长较明显，顺铂组精神、活动无明显变化，体重降低显著；与顺铂组比较，大黄(庶虫)虫丸组小鼠精神状态有所改善，活动和饮食量有所增加，体重增长明显。
　　2.脏器指数：与空白组比较，造模后小鼠的脏器指数均有所降低，顺铂组降低最明显，2周时脾指数有显著性差异，4周时胸腺指数与脾指数降低均有非常显著性差异；与被动吸烟组比较，大黄(庶虫)虫丸脏器指数有所提高，2周时无显著性差异，4周时出现显著性差异；与顺铂组比较，大黄(庶虫)虫丸组小鼠脾指数提高，并有显著性差异。
　　3.形态学改变：与空白组比较，造模后小鼠肺组织可见异型性细胞,细胞核大、深染,可见异常核分裂象；被动吸烟可使小鼠肺组织异型性细胞明显增多，可见异型性细胞成半环状及环状排列，病灶周围伴有肺气肿形成、出血及炎细胞浸润；大黄(庶虫)虫丸可使被动吸烟的模型小鼠肺组织异型性细胞减少，病变减轻；顺铂可使小鼠肺组织异型性细胞明显减少，病变减轻，可见个别异型性细胞,偶见细胞核分裂。4周后造模小鼠异型性细胞较2周多，可见明显异型性细胞成半环状及环状排列，有肺泡间隔增厚和炎细胞浸润现象。
　　4.免疫指标IL-2：与空白组比较，造模后小鼠血清中细胞因子IL-2含量均减少，模型组小鼠有显著性差异，其中被动吸烟组减少最显著，有非常显著性差异；与被动吸烟组比较，大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组小鼠血清中细胞因子IL-2含量均增多，均有显著性差异；大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组比较，大黄(庶虫)虫丸提高较明显，但无显著性差异。4周结果与2周相同。
　　5.免疫指标CD4+CD25+Foxp3+：2周后，与空白组比较，造模小鼠脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例均提高，其中被动吸烟组提高最显著，并有非常显著性差异；与被动吸烟组比较，大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组小鼠脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例有所下调，顺铂组下调较明显，但均无显著性差异；与顺铂组比较，大黄(庶虫)虫丸组有所上调，但无显著性差异。
　　4周后，与空白组比较，造模小鼠脾组织CD4+CD25+Foxp3+Treg占CD4+T细胞的比例均提高，均有显著性差异；与模型组比较，被动吸烟组、大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组小鼠脾组织 CD4+CD25+Foxp3+Treg占 CD4+T细胞的比例均下调，均无显著性差异；与被动吸烟组比较，大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组均有下调，顺铂组下调较明显，但均无显著性差异。
　　6.Foxp3基因表达：2周后，与空白组比较，造模小鼠的脾组织Foxp3基因表达均增强，被动吸烟组最明显，有非常显著性差异；与被动吸烟组比较，大黄(庶虫)虫丸组、顺铂组脾组织Foxp3基因表达均下降，并均有非常显著性差异；大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组相比，顺铂组脾组织Foxp3基因表达下降，有显著性差异。
　　4周后，与空白组比较，模型组、大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组小鼠Foxp3基因表达水平均增强，模型组有非常显著性差异，被动吸烟组小鼠Foxp3基因表达水平下降，有显著性差异；与模型组比较，被动吸烟组、大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组均下降，被动吸烟组、顺铂组均有非常显著性差异，大黄(庶虫)虫丸组无差异；与被动吸烟组比较，大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组小鼠均增强，均有显著性差异；大黄(庶虫)虫丸组与顺铂组小鼠Foxp3基因表达水平无显著性差异。
　　结论
　　1.Lewis肺癌细胞可引起昆明种小鼠腋下瘤块形成；
　　2.被动吸烟对Lewis肺癌荷瘤小鼠一般情况、体重、脏器指数、形态学改变及免疫指标均有明显影响（P<0.05或P<0.01）；
　　3.大黄(庶虫)虫丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠被动吸烟条件下的一般情况、体重、脏器指数、形态学改变及免疫指标均有明显改善及免疫调节作用（P<0.05或P<0.01），与顺铂组比较，无明显差异。其中一般情况、体重、脏器指数变化优于顺铂组（P<0.05）。
　　4.大黄(庶虫)虫丸对Lewis肺癌荷瘤小鼠一般情况、体重、脏器指数变化优于顺铂组,可能是通过提高小鼠血清中细胞因子IL-2含量，降低小鼠脾组织 CD4+CD25+Foxp3+Treg占 CD4+T细胞的比例及Foxp3基因表达而达到的。

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缩略词表

前言

理论研究

1中医药治疗肺癌的研究现状

2大黄? 虫丸治疗肺癌的研究现状

3大黄? 虫丸治疗肺癌的理论依据

实验研究

1实验材料

2实验方法

3 统计

4 结果

5小结

讨论

1肺癌动物模型造模方法的探讨

2被动吸烟对lewis肺癌荷瘤小鼠影响的探讨

3大黄? 虫丸提高Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能的机理探讨

4大黄? 虫丸抑瘤抗癌机制的探讨

结语

参考文献

附录

文献综述: 大黄? 虫丸的药理和临床应用研究进展

附图

个人简历

致谢