神犀丹对内毒素休克大鼠损伤脏器的保护作用及炎症细胞因子影响的研究

摘要

近年来，随着中医对临床急危重症工作的开展，中医对感染性休克病因病机及治则认识的不断加深，提出外来温热毒邪，引起正气不足，气耗阴脱、脉络瘀阻，阴阳之气不相顺接，阳气郁闭于内，四肢得不到温养，以致逆冷成厥，气机逆乱，神明失主是其主要病机，采用凉血化瘀解毒，养阴生津，芳香化浊开窍法治疗，取得一定的疗效。本课题在既往临床有效的前提下，研究神犀丹对感染性休克大鼠损伤脏器的保护作用，并从相关炎症细胞因子角度研究其作用机制，以期为该方所体现的治法治疗感染性休克的作用机制研究开辟思路，为临床运用提供理论根据。
　　目的：观察凉血散血开窍法代表方神犀丹对内毒素休克大鼠损伤脏器的保护作用及相关炎症细胞因子的影响。
　　方法：
　　实验一采用60只SPF级,SD大鼠,雄性,随机分为正常组、模型组、神犀丹组。除正常组外，其余各组均给予腹腔注射D_氨基半乳糖（GalN）和尾静脉注射脂多糖（LPS）复制内毒素休克大鼠模型，采用BL-42OE+生物机能实验系统全程监测平均动脉压（MAP）的变化，于0、2、6h采集血清标本，检测全血细胞、血清总胆红素（TB）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶（ALT）的含量；于0、2、6h每组处死大鼠4只，苏木精-伊红（HE）染色，光镜下观察大鼠肺肝组织的病理变化。
　　实验二采用24只SPF级,SD大鼠,雄性,随机分为正常组、模型组、神犀丹组。除正常组外，其余各组均给予腹腔注射D_氨基半乳糖（GalN）和尾静脉注射脂多糖（LPS）复制内毒素休克大鼠模型，于0、2、6h采用酶联免疫吸附法，检测TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10等细胞因子表达水平。
　　采用统计学软件spss19.0进行单因素方差分析。实验数据用均数±标准差（x±s）表示，组间比较用F检验，以P<0.05表示差异有统计学意义，P<0.01表示差异有统计非常显著意义。
　　结果：
　　1.平均动脉压的变化情况：在实验过程中正常组大鼠血压大致保持正常，有轻微下降考虑是与每次抽血和实验创伤有关；模型组大鼠在注射内毒素后，血压大多数在0.5h开始下降，之后持续缓慢波动性下降；神犀丹组大鼠血压的变化趋势与模型组基本相同，但血压开始下降的时间迟于模型组，至6h时下降明显，6h时间点血压降低程度与模型组相比明显减轻。
　　2.全血细胞含量变化:注射 LPS后2h、6h，模型组白细胞(WBC)明显低于正常组;神犀丹组在注LPS后2h和6hWBC也明显降低，与正常组比较有显著性差异意义,与模型组相比无显著性差异。血小板计数(plt)在2小时，模型组与神犀丹组均无明显下降；而至6h时，模型组 plt明显低于正常组,但是神犀丹组却无明显降低，明显高于模型组,说明神犀丹能降低血小板的聚集。
　　3.大鼠血生化TB、LDH、AST、ALT含量变化：与正常组比较，模型组大鼠血清中TB、LDH、AST、ALT的含量均显著升高；神犀丹组与模型组比较，血清TB、LDH、AST、ALT的含量上升幅度与模型组比较有显著差异。
　　4.肺组织病理学改变：
　　肉眼观察:正常组,肺膨胀良好,表面无出血;模型组,肺体积增大,呈暗红色,表面可见不同程度充血水肿,或见点灶状出血;神犀丹组肺脏呈浅红色,表面不同程度充血水肿。
　　光镜下肺组织形态：不同时间点（0、2、6h）正常组肺组织形态结构清晰，肺泡完整，未见炎症细胞浸润病变；模型组2小时大鼠肺毛细血管明显扩张出血，血管腔内有微血栓形成，肺泡间隔增宽增厚，大量炎性细胞浸润；6小时大鼠肺组织结构紊乱，肺泡腔内纤维蛋白渗出，部分肺泡萎缩，可见大量炎症细胞浸润。神犀丹组2小时大鼠肺血管腔内可见少量红细胞，肺间质结构基本正常，肺泡壁少量炎性渗出物，可见轻到中度炎症细胞浸润；6小时大鼠可见肺内充血，肺泡腔及肺间质可见中量炎症细胞浸润。
　　5.肝组织病理学改变：
　　光镜下肝组织形态：不同时间点（0、2、6h）正常组肝组织：肝窦形态结构清晰，未见炎症细胞浸润；模型组2小时大鼠肝细胞大量弥漫性坏死，肝窦结构紊乱，汇管区可见轻到中度炎症细胞浸润；6小时大鼠肝细胞大量片状弥漫性坏死，肝窦结构破坏，汇管区可见大量炎症细胞浸润。神犀丹组2小时大鼠肝细胞少量弥漫性坏死，肝窦结构紊乱，汇管区可见轻到中度炎症细胞浸润；6小时大鼠肝细胞点状坏死，汇管区可见大量炎症细胞浸润。
　　6.大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10表达水平：与正常组比较，不同时间点(2、6h)模型组及神犀丹组大鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的表达水平均显著升高；神犀丹组与模型组比较，经药物干预后的神犀丹组血清TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、IL-10的表达水平上升幅度与模型组比较有显著性差异。
　　结论：
　　1.神犀丹能有效缓解内毒素休克大鼠血压下降程度，进而对损伤脏器起保护作用。
　　2.神犀丹有改善内毒素休克大鼠感染情况、改善肝功能，降低血小板聚集，改善微循环的作用。
　　3.神犀丹能够明显减轻内毒素休克大鼠肺肝组织的炎症反应。
　　4.凉血散血开窍法典型方神犀丹能够显著降低大鼠血清促炎因子与抗炎因子的表达水平，抑制内毒素诱导内源性炎症介质的释放，进而维护体内环境稳定，恢复机体各脏腑正常的生理功能，可能是防治内毒素性休克机制之一。

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缩略词表

前言

实验研究

实验一 神犀丹对内毒素性休克大鼠脏器损伤的保护作用实验研究

实验二 神犀丹对内毒素休克大鼠炎症细胞因子的影响实验研究

讨论

1.内毒素休克造模的选择

2.内毒素休克肺肝损伤机制

3.内毒素休克中促炎细胞因子与抗炎细胞因子作用机制

4.感染性休克病机探讨

5.神犀丹

结论

结语

参考文献

综述: 中医药对感染性休克的认识与治疗进展

附图

致谢