标本配穴电针对慢性心肌缺血模型大鼠心室重构的影响研究

摘要

目的：
　　心肌缺血属于心血管疾病中威胁当代人类生命和健康的主要因素，现呈年轻化方向发展，死亡率呈上升趋势。针刺防治心肌缺血，一直为当代学者研究热点，但其防治疾病的作用机制仍不明确，一定程度上影响了针灸在心肌缺血临床的应用及推广。
　　相关研究表明，在心肌缺血的过程中心室会发生重构，其中包括血管重构和电重构两个方面。在本课题中，选用慢性心肌缺血大鼠为模型作为研究对象，在中医治未病理论的指导下，根据标本配穴法进行腧穴配伍，以心室重构为切入点，运用蛋白质印迹（Western blot）及免疫组化等技术，观察标本配穴电针对血管重构及电重构的影响，探讨标本配穴电针防治慢性心肌缺血的作用机制，为针刺防治慢性心肌缺血提供科学实验依据。
　　方法：
　　1.选取SPF级Wistar大鼠雄性60只，随机分为4组：正常组（Control）、模型组（CMI）、内关治疗组(CMI+PC6)、标本配穴治疗组（CMI+EA），每组15只。CMI、CMI+PC6、CMI+EA组均采用连续14天腹部皮下注射ISO（0.004ml/g）。Control组给予连续14天等量0.9％生理盐水腹部皮下注射。于第一天、第22天采用BL-420生物机能实验系统检测，观察ST段电压振幅变化，以CMI组大鼠心电图中ST段抬高≥0.1mv或者下移≥0.05mv作为造模成功的标志。
　　2.Control组、CMI组大鼠只抓取固定，不针刺治疗。CMI+PC6组大鼠针刺双侧内关穴，CMI+PC6组在内关穴右旁开0.5cm处另皮下浅刺一针作辅助电极，与内关穴组成一对电极，CMI+EA组大鼠针刺双侧内关穴、双侧足三里穴及关元穴，CMI+EA组同侧穴位组成一对电极，在关元穴右旁开0.5cm处另皮下浅刺一针作辅助电极，与关元穴组成一对电极，连接HANS-200电针治疗仪，连续波，频率2Hz，强度1mA，以大鼠肢体有震颤感为适宜强度，通电10min。每日治疗1次，共21天。
　　3.第22天，10%水合氯醛麻醉大鼠，仰卧固定于鼠板上，心前区剃毛，应用Agilent Sonos5500型彩色超声心动图诊断仪，10S探头，频率为8 MHz，对大鼠的心脏大小及功能进行检测。检测指标包括：左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)，并计算出左室射血分数（LVEF,%）。
　　4.观察造模期及治疗期大鼠死亡情况，计算大鼠死亡率。并第22天心脏取材，用蛋白质印迹法检测蛋白VEGF、HIF-1α、Cx43表达，免疫组化检测心肌缺血组织中Cx43的分布，HE染色检测心肌缺血面积。取血用于Elisa检测血清MOD含量、SOD活力及VEGF含量，并对数据进行统计和分析。
　　结果
　　1.（1）与Control组比较，CMI组大鼠死亡率升高，具有非常显著性差异（P<0.01）。（2）造模后，CMI大鼠ST段电压明显高于Control组，具有非常显著性差异（P<0.01）；CMI+PC6组大鼠ST段电压低于CMI组，具有统计学差异（P<0.05）；CMI+EA组大鼠ST段电压低于CMI，具有非常显著性差异（P<0.01）。（3）CMI组大鼠的LVEDD、LVESD均高于Control组，具有非常显著性差异（P＜0.01），LVEF低于Control组，具有非常显著性差异（P＜0.01）。CMI+PC6、CMI+EA组大鼠的LVEDD值、LVESD值均低于CMI组，具有非常显著性差异（P＜0.01），LVEF值均高于CMI组，具有非常显著性差异（P＜0.01）；CMI+EA组中LVEDD值低于CMI+PC6组，具有非常显著性差异（P＜0.01）；CMI+EA组中LVESD值低于CMI+PC6组，具有统计学差异（P＜0.05），LVEF值高于CMI+PC6组，具有统计学差异（P＜0.05）。（4）CMI大鼠MDA含量高于正常组（P<0.05），总SOD活力低于正常组（P<0.05）；CMI+PC6、CMI+EA组大鼠与CMI大鼠比较MDA、总SOD活力含量，差异有统计学意义（P<0.05）；CMI+EA大鼠与CMI+PC6比较总SOD活力含量有统计学差异（P<0.05）。
　　2.（1）与Control组比较，CMI组大鼠血清中VEGF的含量升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；与CMI组比较，CMI+PC6组大鼠的血清中VEGF含量升高，具有统计学差异（P<0.05）；CMI+EA组大鼠血清中VEGF含量明显高于CMI组，比较差异有非常显著性差异（P<0.01）；CMI+EA与CMI+PC6组大鼠血清中VEGF含量，差异有统计学意义（P<0.05）。（2）CMI组大鼠的 IS/LV、AAR/LV比值均高于Control组，差异具有非常显著性意义（P<0.01）；CMI+PC6、CMI+EA组大鼠的IS/LV、AAR/LV比值均低于CMI组，差异具有非常显著性意义（P<0.01）；CMI+EA组大鼠IS/LV、AAR/LV比值低于CMI+PC6组，差异具有非常显著性意义（P<0.01）。应用HE染色， CMI组心肌严重受损，心肌细胞肥大，肌浆凝聚，呈强嗜酸性染色（深红），肌纤维排列紊乱，甚至出现扭曲，间隙增宽，心肌纤维化，细胞核破裂、溶解，分布混乱；CMI+PC6组心肌缺血情况明显改善，心肌细胞较为整齐，局部纤维化减少，细胞核溶解减少；CMI+EA组较CMI组明显改善。（3）与Control组比较，CMI组VEGF、HIF-1α蛋白灰度值比值上调，有非常显著学差异(P<0.01)；CMI+EA组的VEGF、HIF-1α蛋白灰度值比值高于CMI组，有非常显著学差异(P<0.01)；CMI+PC6组HIF-1α蛋白灰度值比值与CMI组比较有非常显著性差异（P<0.01）；CMI+PC6组与CMI+EA组比较VEGF蛋白灰度值比值有非常显著性差异（P<0.01），比较HIF-1α蛋白灰度值比值有统计学差异（P<0.05）。
　　3.（1）与Control组比较，CMI组 Cx43蛋白水平表达降低，有统计学差异（P<0.05）；CMI+EA组与CMI组比较Cx43蛋白水平表达有统计学差异（P<0.05）；与CMI+EA组比较，CMI+PC6组Cx43蛋白表达低于CMI+EA组，有统计学差异（P<0.05）。（2）Control组大鼠心肌Cx43呈线性规律分布于心肌细胞闰盘处端端连接处，少量位于细胞膜侧面；CMI大鼠心肌Cx43深棕色颗粒分布明显散乱、稀疏，端端连接处明显减少，分布侧边化；CMI+PC6较CMI组大鼠心肌端端之间连接增多，也有部分分布侧侧连接处；CMI+EA组大鼠Cx43深棕色颗粒多于CMI+PC6组，分布与CMI+PC6组相似。与Control组比较，CMI组大鼠心肌Cx43的平均光密度值明显降低（P<0.05）；与CMI组大鼠比较，CMI+PC6、CMI+EA组Cx43平均光密度值均明显升高（P<0.05）。
　　结论
　　1.对ST段电压及氧化应激的影响：电针能够通过降低心肌缺血模型大鼠ST段电压，心功能LVEDD、LVESD值，提高LVEF值，改善心脏功能；也能够通过调节MDA含量，提高SOD活力，减少脂质过氧化物的堆积，起到抗自由基损伤的作用，且标本配穴电针比电针单穴内关具有更好的效应。
　　2.对血管重构的影响：电针能够通过刺激VEGF、HIF-1α分泌，上调其表达，促进新血管的再生，促进侧支循环的建立，缓解缺血损伤，促进心肌保护作用，且标本配穴电针较电针单穴内关有更好的效应。
　　3.对电生理重构的影响：电针能够通过上调Cx43蛋白表达水平，改善Cx43的分布，从而促进缝隙连接的正常生理功能，改善电生理传导，改善心室重构，有效防治心肌缺血，且标本配穴电针较电针单穴内关有更好的效应。

目录

声明

缩略词表

前言

实验一 标本配穴电针对慢性心肌缺血大鼠心功能及氧化应激的影响

1.实验材料

2.实验方法

3.检测指标

4.结果

5.讨论

实验二 标本配穴电针对慢性心肌缺血大鼠血管内皮生长因子的影响

1.实验材料

2.实验方法

3.检测指标

4.结果

5.讨论

实验三 标本配穴电针对慢性心肌缺血模型大鼠缝隙连接蛋白43的影响

1.实验材料

2.实验方法

3.检测指标

4.结果

5.讨论

讨论

1.“治未病”之义

2.针刺实验研究

3.标本配穴电针对慢性心肌缺血大鼠心室重构的影响

4.本课题创新点

结语

参考文献

附录一 文献综述:试述缝隙连接蛋白43与心肌缺血的相关性

附录二 研究生期间已发表论文及参与课题

致谢