补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠OPG/RANKL/RANK通路影响的研究

摘要

目的：
　　从理论角度分析绝经后骨质疏松的病因病机，并通过实验研究观察去势骨质疏松大鼠OPG/RANKL/RANK信号通路变化，探讨补肾化痰方对PMOP的治疗作用及作用机制，为补肾化痰方的临床应用提供科学依据。
　　方法：
　　1、理论研究
　　对古今相关文献进行系统的回顾总结，以了解中医对PMOP的病因病机及治则治法的认识，为临床试验研究提供理论依据。
　　2、实验研究
　　选取SPF级6月龄SD雌性大鼠，按体重分层后随机分为模型组、假手术组、补肾组、补肾化痰组。采用去势法建立绝经后骨质疏松症动物模型。术后5周开始灌胃给药。补肾组以补肾方（组成：菟丝子30g、淫羊藿10g、补骨脂15g）灌胃，补肾化痰组以补肾化痰方（组成：菟丝子30g、淫羊藿10g、补骨脂15g、全瓜萎15g、红曲12g,山楂20g）灌胃，模型组、假手术组以等体积的生理盐水灌胃。给药8周后，麻醉处死大鼠，摘除双侧眼球取血离心，取血清，ELISA法检测各组大鼠血清中OPG、RANKL的含量；取大鼠右后肢股骨组织，Western Blot法检测OPG、RANKL蛋白的表达。
　　统计学处理：采用SPSS19.0统计软件进行方差分析，所有数据均以均数±标准差(-x±s)表示，组间数据比较采用 ONE-WAY ANOVA(单因素方差分析），P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1、理论研究
　　查阅文献，研究表明OPG/RANKL/RANK信号通路是骨代谢过程中重要的信号通路，能够影响PMOP的发病。回顾古今研究PMOP的相关文献，对PMOP的病因病机的认识主要包括肾虚髓亏、脾胃虚弱、肝血不足、瘀血阻滞。而基于脂代谢异常与PMOP有关的认识，导师向楠教授提出痰浊也是OP发病的重要因素，并据此制定治疗PMOP的新治法——补肾化痰法，所选补肾化痰方为导师向楠教授临床经验方，在临床和动物实验中都已初步证实，补肾化痰方对PMOP有较好的治疗效果。而补肾化痰方是否能够影响OPG/RANKL/RANK信号通路还有待进一步的研究。
　　2、实验研究
　　（1）各组大鼠血清OPG、RANKL、OPG/RANKL的水平：模型组与假手术组相比，血清OPG含量降低，血清RANKL含量增高，OPG/RANKL的比值降低，差异均有显著统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，补肾组及补肾化痰组的血清OPG含量及OPG/RANKL的比值均增高，血清RANKL含量均降低，差异均有显著统计学意义（P＜0.01）；与补肾组比较，补肾化痰组的血清OPG水平及OPG/RANKL的比值更高，血清RANKL含量更低，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。
　　（2）各组大鼠骨组织OPG、RANKL、OPG/RANKL的水平：模型组与假手术组大鼠相比，骨组织OPG表达降低，骨组织RANK表达增高，OPG/RANKL的比值降低，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，补肾组及补肾化痰组的骨组织OPG表达及OPG/RANKL的比值增加，骨组织
　　RANKL表达均降低，差异有显著统计学意义（P＜0.01）；与补肾组比较，补肾化痰组的骨组织RANKL及OPG表达均更低，差异有显著统计学意义（P＜0.01）,OPG/RANKL的比值更高，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　在中医理论指导下，应用补肾化痰方治疗绝经后骨质疏松症有理论基础，也有实验研究支持。实验研究所用补肾化痰方能增加去势大鼠血清及骨组织 OPG的含量，降低血清和骨组织 RANKL的含量，上调 OPG/RANKL的比值，改善OPG/RANKL比值的作用优于补肾方，提示补肾化痰方对去势骨质疏松症模型大鼠的治疗作用与影响OPG/RANKL/RANK信号通路，改善骨吸收有关。

目录

声明

缩 略 词 表

前言

第一部分 理论研究

1 西医对绝经后骨质疏松症的认识

1.1 骨质疏松症的发病机制

1.2 OPG/RANKL/RANL信号通路与骨质疏松症

1.3 西医对骨质疏松症的治疗

2.1 对病名的认识

2.2 病因病机

2.3 辨证论治

第二部分 实验研究

1 实验材料

1.1 药品

1.2 实验动物

1.3 试剂

1.4 仪器

2 实验方法

2.1 绝经后骨质疏松症动物模型的建立

2.2 动物分组及给药

2.3 取材

2.4 ELISA法检测各组大鼠血清中OPG、RANKL的含量

2.5 Western Blot法检测各组大鼠骨组织中OPG、RANKL蛋白的表达

3 统计学分析

4 实验结果

4.1 一般情况观察

4.2 各组大鼠血清OPG、RANKL的含量及OPG/RANKL的比值

4.3 各组大鼠骨组织OPG、RANKL的表达水平及OPG/RANKL的比值

5 讨论

5.1 绝经后骨质疏松症动物模型的建立

5.2 OPG/RANKL/RANK信号通路

5.3 OPG/RANKL/RANK信号通路与绝经后骨质疏松

5.4 补肾化痰方对OPG/RANKL/RANK信号通路的影响

6 小结

参考文献

结语

附录

附录一 综述:骨质疏松症动物的建立与评价

附录二 图表

致谢