斑地锦正丁醇萃取物对小鼠肝损伤的保护作用及其化学成分研究

摘要

目的：研究斑地锦正丁醇萃取物对小鼠肝损伤的保护作用及其化学成分，为斑地锦的临床应用提供理论和实验基础。
　　方法：
　　1、斑地锦正丁醇萃取物对小鼠肝损伤的保护作用研究
　　60只雄性昆明小鼠，随机分为正常组，模型组，斑地锦正丁醇萃取物低、中、高剂量组和联苯双酯组，共6组，每组10只。空白组和模型组给予等容积的蒸馏水，其他组灌胃给予相应剂量的药物15d，每天上午灌胃1次，在末次灌胃药物后1h，除正常组外，其余组以60％乙醇12mL/kg诱导小鼠急性肝损伤，禁食不禁水，24h后，摘眼球取血，分离血清，并快速取出肝脏。测定血清中AST、ALT、TC和TG水平，肝匀浆中MDA、SOD和GSH水平。部分肝脏切片后，HE染色观察病理组织形态，部分以RT-qPCR分析肝组织中TLR4、NF-κB、TNF-α基因的mRNA表达。
　　2、斑地锦正丁醇萃取物的化学成分研究
　　利用MTT法考察斑地锦正丁醇萃取物的大孔树脂洗脱部位对扑热息痛诱导的HepG2细胞损伤的保护作用。通过计算细胞存活率，确定对扑热息痛诱导的HepG2细胞损伤具有保护作用的活性部位。然后对其活性部位以反相硅胶柱、MPLC制备及反复的Sephadex LH-20柱进行分离纯化。
　　3、斑地锦正丁醇萃取物中单体鞣花酸对小鼠肝损伤的保护作用研究
　　50只雄性昆明小鼠，随机分为5组，分别为正常组，模型组，鞣花酸低、高剂量组和联苯双酯组，每组10只。空白组和模型组给予等容积的蒸馏水，其他组灌胃给予相应剂量的药物15d，每天上午灌胃1次，在末次灌胃药物后1h，除正常组外，其余各组以60%乙醇12ml/kg诱导小鼠急性肝损伤，禁食不禁水，24h后，摘眼球取血，分离血清，并快速取出肝脏。测定血清中AST、ALT、TC和TG水平，肝匀浆中MDA、SOD和GSH水平。部分肝脏切片后，HE染色观察病理组织形态，部分以RT-qPCR分析肝组织中TLR4、NF-κB、TNF-α基因的mRNA表达。
　　结果：
　　1、与正常组相比，酒精性肝损伤模型组血清中AST、ALT、TG、TC水平明显升高，肝匀浆中MDA含量明显增加，SOD和GSH水平则降低，TLR4、NF-κB、TNF-α基因的mRNA表达量明显增加；病理组织学观察到肝细胞排列紊乱，发生严重的变性，坏死，细胞质疏松，细胞核深染等情况。与模型组相比，斑地锦正丁醇萃取物低、中、高剂量组均可以明显降低ALT、TG水平（P<0.05，P<0.01，P<0.01），升高SOD水平（P<0.05，P<0.01）；斑地锦正丁醇萃取物中、高剂量组可以显著降低AST、TC、MDA水平（P<0.01， P<0.01），升高GSH水平（P<0.01，P<0.01）；斑地锦正丁醇萃取物低、中、高剂量组均可以显著降低肝组织中NF-κB、TNF-α基因的mRNA表达（P<0.01，P<0.01，P<0.01）；中、高剂量组还能显著降低TLR4基因的mRNA表达（P<0.01，P<0.01）。病理组织学显示斑地锦正丁醇萃取物各剂量组均不同程度的减轻了肝组织的病理损伤程度。
　　2、斑地锦正丁醇-50%乙醇部位、70%乙醇部位和95%乙醇部位在1～10μg/mL范围内对扑热息痛引起的HepG2细胞的损伤均具有保护作用；对以上三个保肝活性部位进行分离，从斑地锦正丁醇萃取物的50%乙醇部位得到了3个单体化合物，从70%乙醇部位和95%乙醇部位均得到了1个单体化合物。经LC-MS和NMR分析，确定其为槲皮素、山奈酚和鞣花酸。
　　3、与模型组相比，鞣花酸可以明显降低AST、ALT、TC、TG、MDA水平，显著升高SOD、GSH水平（P<0.01）；能明显降低TLR4、NF-κB、TNF-α基因的mRNA表达。病理组织学结果显示，鞣花酸各剂量组均不同程度的减轻了肝组织的病理损伤程度。
　　结论：
　　1、斑地锦正丁醇萃取物对乙醇诱导的急性酒精性肝损伤具有保护作用，其作用机制与改善脂质代谢、抗氧化及通过抑制TLR4—NF-κB信号通路的活化来减少细胞炎症因子（如TNF-α）的产生等有关。
　　2、斑地锦正丁醇-50%乙醇部位、70%乙醇部位和95%乙醇部位对扑热息痛诱导的HepG2细胞的损伤具有保护作用；从斑地锦正丁醇50%乙醇部位得到了槲皮素、山奈酚、鞣花酸，从70%乙醇部位和95%乙醇部位均得到了鞣花酸。
　　3、鞣花酸可通过调节脂质代谢、抗氧化及抗炎作用来发挥对酒精性肝损伤的保护作用。

目录

声明

缩略词表

前言

第一部分 斑地锦正丁醇萃取物对小鼠肝损伤的保护作用研究

1、实验材料

2、实验方法

3、实验结果

4、讨论

第二部分 斑地锦正丁醇萃取物的化学成分研究

1、实验材料

2、实验方法

3、实验结果

4、讨论

第三部分 斑地锦正丁醇萃取物中单体鞣花酸对小鼠肝损伤的保护作用研究

1、实验材料

2、实验方法

3、实验结果

4、讨论

结语与创新

参考文献

附录

一、文献综述:中药抗肝损伤作用的研究进展

二、攻读硕士期间发表的论文情况

附图

致谢