基于PKA/CREB信号通路探讨涤痰化瘀开窍法对血管性痴呆大鼠的影响

摘要

目的: 血管性痴呆（VD）是痴呆发病的第二位原因，痰浊、瘀血是引起 VD发病的重要病理因素，由于脑窍生理功能及结构的特殊性，需要在涤痰化瘀的同时运用通脑窍的方法，即涤痰化瘀开窍的治法。本文回顾和总结了古代医家对VD疾病、病因病机、治法、方药的认识，对现代中医药治疗VD的进展进行了概述。从涤痰化瘀开窍的治法探讨VD发病的机理和治疗原则，本课题以SD大鼠动脉粥样硬化复合脑缺血模型作为VD动物模型，观察涤痰化瘀开窍法对大鼠行为学、血脂和炎性因子、海马区微血管密度（MVD）、脑组织病理形态和PKA-CREB信号通路的影响，探讨涤痰化瘀开窍法对该模型的干预作用及其机理，旨在为涤痰化瘀开窍法防治VD提供理论基础和实验依据。 方法： 1.理论探讨：整理与中医涤痰化瘀开窍法有关的相关文献，分析涤痰化瘀开窍法的概念和内涵，及其防治VD的理论和中医临床基础。 2.实验研究：以SD大鼠动脉粥样硬化复合脑缺血模型作为VD动物模型，以PKA-CREB信号通路为研究靶点，研究涤痰化瘀开窍法对VD的作用机制。Morris水迷宫实验观察对大鼠行为学的影响，检测其学习、记忆能力。海马HE染色、免疫组织化学染色法观测大鼠海马区MVD及大鼠海马区病理变化。ELISA法测定大鼠海马区炎性因子、血管内皮生长因子及PKA-CREB通路上、下游相关物质的表达。用 Western Blot法检测大鼠海马组织PKA-CREB途径主要蛋白表达量。 结果 1.MORRIS水迷宫 定向航行实验：灌胃4周后模型组与空白组大鼠比较，模型组大鼠发现平台时间明显延长(P<0.01)，游泳总路程明显增加(P<0.01)；与模型组比较，各组大鼠发现平台时间均有缩短(P<0.05，P<0.01)，游泳总路程均减少(P<0.05，P<0.01)；与涤痰汤原方组比较，活血组发现平台时间延长(P>0.05)，游泳总路程明显增加（P<0.01）。涤痰汤加味组与原方组比较，发现平台时间较短(P>0.05)，游泳总路程缩短(P<0.05)。空间探索实验：表现出与定向航行实验相似的趋势。 2.对血脂及炎性因子的影响 模型组大鼠血脂与空白组比较，TC、TG、LDL明显增高（P<0.01）， HDL明显降低（P<0.01）。各用药组给药4周后，大鼠 TC、TG、LDL均有不同程度降低，HDL有不同程度升高，其中以涤痰汤加味组最为明显。炎性因子方面，模型组大鼠海马组织炎性因子表达较空白组明显升高（P<0.01），经用药后，各用药组大鼠海马组织中炎性因子均有一定程度降低，其中以涤痰汤加味组最为明显。 3.对微血管密度及海马组织病理形态学的影响 造模后用药4周进行相关检测，模型组大鼠海马组织中Ang-1，VEGF含量较空白组明显降低（p<0.01）；各用药组与模型组比较，大鼠海马组织内Ang-1、VEGF含量均明显增高（p<0.01），其中涤痰汤加味组增高最多；免疫组化显示：模型组大鼠海马区微血管数明显少于空白组（P<0.01），用药后各用药组海马区血管密度均有不同程度的增高，其中以涤痰汤加味组最为明显，其次为涤痰汤原方组。HE染色显示：空白组大鼠CA1区可见大量椎体细胞，排列紧密、整齐，模型组大鼠CA1区椎体细胞大量丢失，残存细胞肿胀，细胞间质稀疏，坏死细胞数量增多，各用药组与模型组比较，椎体细胞丢失程度较轻，细胞变性坏死较少，其中以涤痰汤加味组最为明显。 4.对VD模型大鼠PKA-CREB信号通路的影响 模型组大鼠海马组织中，cAMP、PKA、CREB、NGF、BDNF表达水平较空白组明显降低（p<0.01）；与模型组比较，各用药组经药物治疗后，上述指标均有不同程度的升高（p<0.01，p<0.05）。涤痰汤加味组升高明显，涤痰汤原方组次之，活血组升高幅度较小。 结论： 1.痰浊和瘀血是导致VD发病的基本因素，涤痰化瘀开窍法是有效防治VD的重要治法。 2.涤痰化瘀开窍法能够改善VD大鼠的认知功能和自主活动能力。 3.涤痰化瘀开窍法治疗VD可能与降低大鼠血脂、炎性因子、促进血管新生，增加PKA-CREB信号通路相关物质表达，发挥抗缺血损伤和脑细胞凋亡有关。

目录

声明

英文缩略词表

前言

第一部分 理论探讨

1中医对血管性痴呆的认识

2涤痰化瘀开窍法治疗血管性痴呆的理论探讨

3涤痰汤加味方治疗血管性痴呆的理论依据

第二部分 实验研究

实验一 动脉粥样硬化血管性痴呆大鼠模型制作

实验二 涤痰化瘀开窍法对VD模型大鼠行为学的影响

实验三 涤痰化瘀开窍法对VD模型大鼠血脂、炎性因子的影响

实验四 涤痰化瘀开窍法对微血管及脑组织病理形态的影响

实验五 涤痰化瘀开窍法对VD模型大鼠PKA-CREB信号通路的影响

结语

一、 课题结论及创新

二、 课题研究展望

参考文献

附录

文献综述:血管性痴呆的发病原因及治疗研究进展

附图

博士研究生在读期间科研及论文情况

致谢