解磷微生物的分离鉴定及其解磷规律的研究

摘要

本研究从黑龙江大学微生物重点实验室提供的菌肥样品中分离出3株具有解磷能力的细菌，分别为R.HH01、R.HH02和R.HH03。通过形态特征、培养特征观察、生理生化特征试验和16SrDNA序列分析，确认这三株菌均为芽孢杆菌属(Bacillus)。R.HH01菌株、R.HH02菌株为苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)，R.HH03菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)，研究进行了三株细菌单批培养过程的生长特征和解磷动态变化的观察。利用正交实验研究了培养条件对三株菌解磷能力的影响。结果表明，三株细菌在有氧条件下均有解无机磷的能力，并以R.HH01最强。解磷过程中培养液pH下降，表明三株细菌的解磷过程与其分泌的酸性物质有关。　　本研究首次证明苏云金芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌具有解磷能力。

目录

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英文文摘

第1章绪论

1.1磷的生物学意义及其在土壤中的化学行为

1.1.1磷的生物学意义

1.1.2土壤中磷的循环

1.1.3土壤磷的转化及有效性

1.1.4土壤对磷的固定

1.1.5土壤中磷酸盐的释放(溶解、解吸)及其影响因素

1.2解磷微生物及其解磷机理

1.2.1解磷微生物

1.2.2解磷微生物的解磷机理

1.3解磷微生物研究进展与趋势

1.3.1研究解磷微生物的意义

1.3.2解磷微生物研究简史

1.3.3微生物研究现状与展望

1.4 16s rRNA序列测定在微生物分类中的应用

1.4.1 16s rRNA序列测定在微生物分类中的意义

1.4.2 16s rRNA序列的测定手段

第2章材料与方法

2.1材料

2.1.1供试材料

2.1.2菌种

2.1.3培养基

2.1.4试剂及配制方法

2.1.5试剂盒

2.1.6主要仪器设备

2.2实验方法

2.2.1解磷细菌的分离与纯化

2.2.2解磷细菌培养特征及菌体形态特征的研究

2.2.3解磷细菌生理特征的研究

2.2.4解磷细菌生化特征测定

2.2.5利用16S rDNA进行解磷细菌的系统发育分析

2.2.6解磷细菌生长特性研究

2.2.7解磷细菌解磷规律的研究

第3章结果与讨论

3.1解磷细菌的分离结果

3.1.1菌肥中细菌总数及解磷细菌数

3.1.2获得的解磷细菌菌株

3.2细菌培养特征及菌体形态特征研究

3.2.1平板菌落特征

3.2.2斜面菌苔特征

3.2.3菌体形态特征

3.2.4细菌运动性

3.3细菌生理特征的研究

3.4细菌生化特征的研究

3.5利用16S rDNA进行解磷细菌的系统发育分析

3.5.1 16S rDNA PCR扩增产物的检测

3.5.2连接载体并克隆16S rDNA结果的检测

3.5.3 16S rDNA测序结果

3.5.4三株菌的系统发育分析(phylogenetic analysis)

3.6解磷细菌生长特性研究

3.6.1细胞生长测定与生长曲线

3.6.2起始pH值对解磷细菌生长的影响

3.7解磷细菌解磷规律的研究

3.7.1解磷细菌生长对培养液pH值的影响

3.7.2解磷细菌生长过程解磷量的动态变化

3.7.3解磷细菌解磷能力影响因素的研究

3.7.4培养液pH值与解磷细菌解磷效果的关系

结论

致谢

参考文献

攻读学位期间发表的论文

附录

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