土壤解磷微生物的分离鉴定

摘要

为了获得具有应用潜力的微生物肥料活性菌株，本研究从河南省郑州、信阳、许昌等地采集35份土壤样品，采用选择性培养基筛选具有解磷功能的微生物菌株，并分别通过钼锑抗比色法和对峙培养法测定其解磷活性和拮抗作用，通过室内盆栽试验检测了解磷活性最强的菌株对番茄植物的促生作用，根据形态特征、生理生化特性、16SrDNA序列分析对分离物进行分类鉴定。试验结果如下:
　　1、采用选择性培养基，从35份土壤样品中筛选获得解磷细菌53株和解无机磷真菌7株。53株解磷细菌中，解无机磷细菌30株，解有机磷细菌23株。
　　2、通过钼锑抗比色法对53株解磷细菌和7株解磷真菌的解磷活性进行了测定。结果表明，供试菌株均能不同程度地从磷酸钙和卵磷脂中释放出一定的可溶态磷，且解无机磷真菌的解磷活性均大于解磷细菌。其中，解磷真菌WPFJ1的解磷活性达180.00μg/mL，解磷细菌WP1的解磷活性为165.72μg/mL。
　　3、拮抗实验表明，15株解磷细菌对番茄早疫病菌(Alternariasolani)、西瓜炭疽病菌（Colletotrichumorbiculare）、小麦赤霉病菌（Fusariumgraminearum）、小麦全蚀病菌（Gaeumannomycesgraminisvar.tritici）、小麦纹枯病菌（Rhizoctoniacerealis）和稻曲病菌（Ustilaginoideaoryzae）等植物病原菌有一定的拮抗作用。
　　4、通过盆栽试验，测定了解磷细菌WP1、WP-BT2-8、YP21和解磷真菌WPFJ1单一菌株和组合菌株的促生作用。结果表明，供试菌株对番茄生长均有一定的促进作用。其中，单一菌株促生试验中，菌株WPFJ1对番茄植株的促生效果最为明显;组合菌株促生试验中，菌株WP1与菌株WP-BT2-8组合，其促生效果最好。
　　5、分别测定了解磷菌WP1、WP-BT2-8、WPFJ1和YP21的生长曲线。结果表明，供试菌株均能在缺乏有效磷的环境下，从底物中分解出可溶性磷。解无机磷菌在培养过程中，其培养液pH下降，初步推断菌株的解磷活性与其分泌的酸性物质有关;解有机磷细菌在培养过程中，其培养液pH变化不明显，初步推断其解磷机理可能为酶解作用。
　　6、分别对53株解磷细菌的16SrDNA序列和7株解磷真菌的ITS序列进行了分析。结果表明，53株解磷细菌分别属于芽胞杆菌（Bacillus）、类芽胞杆菌（Paenibacillus）、假单胞菌属（Pseudomonas）、伯克氏菌属（Burkholderia）、肠细菌属（Enterobacter）、不动杆菌属(Acinetobacter)和沙雷氏菌属(Serratia)7个属，18个种以上，表明河南省土壤解磷细菌种群丰富;7株解磷真菌分别属于青霉属（Penicillium）、曲霉属（Aspergillus）和茎霉属（Chaunopycnis）。解磷活性较强的菌株WP1被鉴定为稳定伯克氏菌（Burholderiastabilis），菌株WP-BT2-8和YP21被鉴定为多粘类芽胞杆菌（Paenibacilluspolymyxa），菌株WPFJ1被鉴定为黑曲霉(Aspergillusniger)。

目录

声明

致谢

摘要

1 文献综述

1．1 解磷微生物的国内外研究概况

1．2 解磷微生物种类、数量和生态分布

1．2．1 解磷微生物的种类

1．2．2 解磷微生物在土壤中的数量和生态分布

1．3 解磷微生物解磷能力及分离筛选的研究

1．3．1 解磷微生物解磷能力的研究

1．3．2 解磷微生物分离方法的研究

1．4 解磷微生物解磷机理的研究

1．4．1 有机酸的酸解作用机制

1．4．2 有机磷的矿化作用机制

1．4．3 解磷微生物解磷机制的分子生物学研究

1．4．4 解磷微生物的其他解磷机制

1．5 解磷微生物对植物生长发育的影响和机理

1．5．1 解磷微生物对植物各部分生长状况的影响

1．5．2 解磷微生物对植物抗逆性的影响

1．5．3 解磷微生物促进植物生长发育的机理

1．6 解磷微生物的前景展望

2 引言

3 材料与方法

3．1 试验材料

3．1．1 土壤样品

3．1．2 供试病原菌

3．1．3 培养基

3．1．4 试剂、指示剂的配制

3．1．5 主要仪器设备

3．1．6 分析软件

3．2 试验方法

3．2．1 解磷微生物的分离筛选与纯化保存

3．2．2 解磷微生物特性研究

3．2．3 解磷微生物促生作用研究

3．2．4 解磷真菌的鉴定

3．2．5 解磷细菌的鉴定

4 结果与分析

4．1 解磷微生物的分离与筛选

4．2 解磷微生物的解磷活性测定

4．2．1 磷标准曲线的绘制

4．2．2 解磷细菌的解磷活性测定结果

4．2．3 解磷真菌的解磷活性测定结果

4．3 解磷细菌对病原菌的抑制作用

4．4 菌株WP1、WP-BT2-8、YP21和WPFJ1生长曲线测定结果

4．5 解磷微生物对番茄的促生作用

4．6 解磷真菌的鉴定结果

4．7 解磷细菌的鉴定结果

5 结论与讨论

5．1 结论

5．2 讨论

5．2．1 关于解磷微生物的分离筛选及解磷活性测定方法的研究

5．2．2 关于解磷微生物在土壤中的分布特点

5．2．3 关于解磷微生物对植物促生作用的研究

5．2．4 关于解磷微生物的解磷机理

参考文献