盐胁迫下甜菜蛋白质含量测定及特异蛋白的分离与鉴定

摘要

盐胁迫是影响植物生长发育的主要环境因子之一。甜菜耐盐性强主要表现在它比其它作物有更强的吸收或容纳Na+的能力。
　　 蛋白质是生物体行使其生理功能的基本单位，也是生命代谢活动的直接体现者，对其功能进行分析和鉴定将会对阐明基因的功能起到推动作用，并且能够更加客观准确的揭示生命现象。
　　 本研究以耐盐型T510品系和盐敏感型210品系甜菜为研究对象，通过对甜菜叶片总蛋白提取方式及电泳条件的优化，最终可获得高分辨率、重复性好的耐盐型T510品系和盐敏感型210品系的2-DE图谱。通过软件分别将两个品系的280mmol/LNaCl溶液处理组与对照组进行对比，T510中可匹配的蛋白点共607个，210中共有317个。通过蛋白点表达量的计算，T510中有15个受盐胁迫影响而变化显著的蛋白质点，在盐胁迫处理中表达丰度减弱的蛋白质点有8个，表达丰度增强的蛋白质点有7个，其中有2个差异表达蛋白点鉴定出未知蛋白；在210品系中有12个受盐胁迫影响而变化显著的蛋白质点，与对照组相比，在盐胁迫处理中表达丰度减弱的蛋白质点有3个，表达丰度增强的蛋白质点有9个，其中有1个差异表达蛋白点鉴定出未知蛋白，有2个差异表达蛋白点鉴定出2种蛋白(P＜0.05)。对两个品系盐胁迫处理的双向电泳图谱进行分析，有288个点相匹配,3个差异点（210品系中点5和点13、T510品系中点11）。210品系中的点5在盐胁迫处理中下调表达，相对应的蛋白点在T510品系中上调表达；210品系中的点13在盐胁迫处理中下调表达，在T510中缺失；T510品系的点11在盐胁迫处理中下调表达，相对应的蛋白质点在210品系盐胁迫处理中上调表达。
　　 28个差异表达蛋白点经扣取、胶内酶解、MALDI-TOF/TOF质谱鉴定后，1个点未被成功鉴定（210品系，点13），其余27个点均被成功鉴定。

目录

第1章 绪论

1.1 土壤盐渍化概述

1.2 盐胁迫对农作物的影响

1.3 甜菜耐盐碱性

1 4 盐胁迫对甜菜生长的影响

1.4.1 直接盐害

1.4.2 间接盐害

1.5 蛋白质组学及其在植物盐胁迫研究方面的应用

1.5.1 植物蛋白质组学的研究

1.5.2 蛋白质组学的研究方法

1.5.3 蛋白质组学在植物盐胁迫研究方面的应用

1.6 本研究的目的及意义

1.7 本研究的技术路线

第2章 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 植物材料

2.1.2 各种试剂及试剂盒

2.1.3 主要实验仪器

2.1.4 试验所需试剂的配制

2.2 试验方法

2.2.1 材料处理

2.2.2 蛋白质样品的制备

2.2.3 第一向等电聚焦电泳

2.2.4 第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

2.2.5 考马斯亮篮染色

2.2.6 凝胶图像扫描和分析

2.2.7 蛋白质的胶内酶解和质谱鉴定

2.2.8 差异表达蛋白的分类

第3章 结果与分析

3.1 盐胁迫对不同品系甜菜生物量影响

3.2 甜菜叶片蛋白含量测定

3.3 甜菜叶片蛋白双向电泳图谱的分析比较

3.3.1 同一品系盐胁迫处理与对照双向电泳图谱比对结果

3.3.2 不同品系盐胁迫处理间和对照间双向电泳图谱比对结果

3.3.3 特异表达蛋自对比结果

3.4 蛋白质点的质谱分析

3.4.1 差异表达蛋白质点的鉴定

3.4.2 差异表达蛋白质的功能分类

第4章 讨论

4.1 样品制备的影响因素

4.2 染色方法对凝胶分辨率的影响

4.3 甜菜蛋白质表达特点的分析

4.4 差异表达蛋白点的讨论

4.4.1 耐盐型T510品系中的差异蛋白点

4.4.2 盐敏感型210品系中的差异蛋白点

4.4.3 盐胁迫条件下不同品系甜菜叶片的差异蛋白点

结论

参考文献

附录

致谢

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